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： 脂质水解酶对昆明小鼠附睾精子成熟和运动的调控作用及机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 脂质水解酶对昆明小鼠附睾精子成熟和运动的调控作用及机制研究/.张昕著/.李亚辉指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.25 |
| 载体形态项： | 68页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院, 学号2020210379 |
| 提要文摘： | 2-花生四烯酸甘油(2-AG)是哺乳动物体内主要的内源性大麻素之一，最新研究发现其通过与精子中钙离子通道CatSper的结合与否对人类精子超激活运动起着关键的调控作用此作用依赖于脂质水解酶ABHD2对2-AG的分解。然而，小鼠精子中2-AG的分解并非由ABHD2承担，本实验室前期研究发现小鼠精子中存在单酰基甘油脂肪酶MAGL以及脂质水解酶ABHD6和ABHD12，?且这三种丝氨酸水解酶能够水解小鼠精子中的2-AG，但脂质水解酶本身的活性形式（磷酸化/非磷酸化）及其调控机制仍未探明；磷酸酶PP1γ2为附睾精子成熟、精子运动等精子功能调控的关键分子，其本身活性调节机制尚不完全清楚，且是否与上述脂质水解酶具有关联性也未可知。同时，精子中CatSper和其它钙离子通道如PMCA4（质膜钙离子泵4）及TRPV1（瞬时受体电位香草酸1）如何发挥精子运动调控作用，上述水解酶是否参与调控精子运动、其机制如何也有待探究。因此，本研究以昆明小鼠为实验材料，通过磷酸化蛋白分离富集提取、Western?blotting、蛋白质免疫共沉淀、Ca2+荧光成像和精子磷酸酶活性分析等技术分析了小鼠附睾头和附睾尾精子中ABHD12、ABHD6或MAGL蛋白磷酸化及非磷酸化形式存在情况，不同钙离子通道抑制剂和MAGL/ABHD12抑制剂对小鼠附睾尾精子运动度的影响，MAGL或ABHD6/ABHD12与PP1γ2是否具有关联性和PP1γ2的活性调节机制，研究结果表明： （1）小鼠附睾尾精子分别与ABHD6/12和MAGL抗体孵育后，2-AG含量较对照组显著增加（P<0.05）；ABHD6/12和MAGL在小鼠附睾尾和附睾头精子中分别以不同的磷酸化/去磷酸化形式存在，且在小鼠精子附睾头精子中2-AG含量显著大于附睾尾精子；说明这三种脂质水解酶均对小鼠精子中的2-AG有水解作用，且ABHD12和MAGL作用较强，而小鼠附睾尾精子中的脂质水解酶磷酸化/去磷酸化形式可能是其作为2-AG水解酶的活性形式。 （2）小鼠附睾尾精子与ABHD12抑制剂DO-264或MAGL抑制剂JZL-184共同孵育后，与对照组相比，其运动度显著降低（P<0.05），钙离子浓度显著降低（P<0.05）；当同时添加IC50的DO-264和JZL-184时，两种抑制剂表现为强拮抗作用（CI>1），说明ABHD12和MAGL通过水解内源性大麻素2-AG，使钙离子通道Catsper开放，钙离子进入精子内，从而调控精子运动，且二者可能同时作用于2-AG，在水解2-AG上可能存在竞争关系； （3）小鼠附睾尾精子分别与CatSper抑制剂HC-056456、TRPV1抑制剂Capsazepine、PMCA4抑制剂Caloxin1b1共同孵育后，与对照组相比，其运动度显著降低（P<0.05），钙离子浓度显著降低（P<0.05）；当采用最大浓度的各抑制剂时，HC-056456组平均荧光强度显著低于TRPV1抑制剂Capsazepine和PMCA4抑制剂Caloxin1b1组（P < 0.05）；说明CatSper，TRPV1，PMCA4均参与小鼠精子内钙离子浓度调控，其中CatSper为最主要的钙离子通道，TRPV1及PMCA4同样发挥作用，但其调控能力有限。 （4）在附睾头精子中SDS22与p17存在相互作用，SDS22与p17结合，则高活性的PP1γ2降低了精子运动度；在附睾尾精子中SDS22与p17无相互作用，则SDS22抑制了PP1γ2的活性，精子运动度提高。 本研究阐明了MAGL、ABHD6和ABHD12在小鼠精子中的存在形式，初步探明了这三种脂质水解酶的活性形式、作用方式和调控机制，探讨了精子中重要钙离子通道与钙离子对小鼠精子运动的调控作用，探明了PP1γ2的活性调节机制，丰富了哺乳动物精子运动性调控的内容，还能对理解男性不孕不育症发病机理、研发新的治疗方法提供新的思路，具有重要的理论意义和现实意义。 |
| 并列题名： | Regulation and mechanism of lipid hydrolases on epididymal sperm maturation and motility in Kunming mice |
| 题名主题： | 蛋白质磷酸化 MAGL ABHD6/12 PP1γ2 精子钙离子通道 学位论文 |
| 中图分类： | Q55-533 |
| 个人名称等同： | 张昕 著 |
| 个人名称次要： | 李亚辉 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |