书目详细信息
： 兰坪乌骨绵羊小眼畸形相关转录因子（MITF）分子克隆与黑色素特征关联研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 兰坪乌骨绵羊小眼畸形相关转录因子（MITF）分子克隆与黑色素特征关联研究/.苑梦雅著/.邓卫东指导 |
| 出版发行项： | 2019.6.3 |
| 载体形态项： | 72页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 兰坪乌骨绵羊以其“乌骨乌肉”的特征而闻名，前期研究表明其乌质特征是因为其体内大量的黑色素，而黑色素可能是蛋白质、碳水化合物、维生素等营养物质除外的一种新型营养物质，但其合成和分泌的机理仍不清楚。为探索兰坪乌骨绵羊高含量黑色素形成的分子机理，本文基于前期转录组测序和全基因组重测序结果，选择小眼畸形相关转录因子（MITF）作为候选基因。通过采集100只兰坪乌骨绵羊、46只兰坪普通绵羊和50只来自云南省曲靖市会泽县普通绵羊血液，测定血浆酪氨酸酶活力、黑色素含量等血液生化指标。运用PCR扩增MITF基因11个外显子及其侧翼区，开展MITF基因的多态性发掘并与乌骨绵羊乌质性状进行关联分析。最后利用TBGreenTM Premix Ex TaqTM II(TIi RNaseH Plus)荧光染料实时定量PCR方法，测定6只兰坪乌骨绵羊和6只兰坪普通绵羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴等组织器官，观察MITF基因的mRNA表达量，实验结果如下： 兰坪乌骨绵羊和兰坪普通绵羊的酪氨酸酶（TYR）活力为496.92±0.004 IU/ml和372.59±0.003 IU/ml；脱黑色素为0.26±0.005 OD/ml和0.17±0.003 OD/ml；碱溶性黑色素为0.19±0.003 OD/ml和0.10±0.002 OD/ml；总黑色素为0.324±0.004 OD/ml和0.329±0.005 OD/ml；真黑色素/总黑色素为0.31±0.004和0.24±0.002；血浆比色的值为0.15±0.004 OD/ml和0.08±0.003 OD/ml.兰坪乌骨绵羊的黑色素指标（血浆比色、TYR活力、脱黑色素、碱溶性黑色素、真黑色素/总黑色素）的含量均显著高于普通绵羊（P<0.05）。 扩增MITF基因的11个外显子，将该基因的11个外显子组装成CDS，CDS区长1441bp，编码481个氨基酸，直接测序检测到MITF基因编码区存在14个多态位点，且只有4个多态位点突变在外显子，分别是G357A、C474T、C491T、C493T，四个多态位点均为同义突变。 利用分子生物学软件预测MITF基因编码的蛋白质结构，MITF蛋白分子质量为55285.81 Daltons（PI=6.407），MITF蛋白定位在细胞核中，K=9/23.由于MITF基因编码的整个氨基酸序列在疏水性区域，因此整体表现为疏水性。统计各绵羊类群4个多态位点的基因频率及基因型频率，经卡方适合性检验，兰坪乌骨绵羊和普通绵羊均处于Hardy-Weinberg平衡状态。兰坪乌骨绵羊与普通绵羊4个多态位点的基因型分布存在极显著差异。 将兰坪乌骨绵羊与普通绵羊MITF基因的4个多态位点的基因型与血浆中黑色素含量指标进行关联分析，结果表明在C491T位点处，具有CC基因型的绵羊酪氨酸酶活力、脱黑色素、碱溶性黑色素和血浆比色的值显著高于绵羊AA和TC型，因此CC基因型为乌骨绵羊的主要基因型，MITF基因的四个多态位点与乌骨绵羊乌质性状存在显著关联。 其次采集12个RNA样本，6只兰坪乌骨绵羊和6只兰坪普通绵羊，各组织心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结用于RNA提取。采用TBGreenTM Premix Ex TaqTM II(TIi RNaseH Plus)荧光染料实时荧光定量PCR方法对MITF基因的mRNA表达水平进行了测定。结果表明：不同绵羊类群中，MITF基因的相对表达量在乌骨绵羊和普通绵羊中存在显著差异，乌骨绵羊心脏、淋巴表达量显著高于普通绵羊，差异极显著（P<0.01）；乌骨绵羊的肝脏和脾脏表达量高于普通绵羊，差异显著（P<0.05），因此，推断MITF基因在绵羊中的表达可能受品种的影响。MITF基因的相对表达量在兰坪乌骨绵羊各组织间呈现极显著差异（P<0.01），淋巴结＞肺脏＞肝脏＞心脏＞脾脏，说明MITF基因的表达具有组织特异性。 综上，本试验通过测定兰坪乌骨绵羊乌质性状相关指标及MITF基因mRNA表达水平，推测MITF可能参与了兰坪乌骨绵羊乌质性状的形成。 |
| 并列题名： | Molecular cloning of microphthalmia related transcription factor (MITF) and association with melanin characteristics in Lanping Black-boned sheep (Ovis aries) |
| 题名主题： | 兰坪乌骨绵羊 黑色素 MITF基因 多态性 乌质性状 学位论文 |
| 中图分类： | S826.92-533 |
| 个人名称等同： | 苑梦雅 著 |
| 个人名称次要： | 邓卫东 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |