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： 基于脂质组学研究高浓度NEFA对肝细胞脂代谢紊乱的作用与机制
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 基于脂质组学研究高浓度NEFA对肝细胞脂代谢紊乱的作用与机制/.蔡金音著/.李小兵指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.5 |
| 载体形态项： | 60页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210422 |
| 提要文摘： | 奶牛脂肪肝是围产期奶牛高发的一种营养代谢性疾病，严重影响奶牛的生产性能。围产期奶牛由于干物质摄入量（dry matter intake，DMI）减少，无法满足自身和胎儿所需要的能量，导致能量负平衡（negative energy balance，NEB）。为缓解能量亏欠，机体脂肪组织大量动员，释放过量的非酯化脂肪酸（nonesterified fatty acids，NEFA）进入血液，引起奶牛高NEFA血症。NEFA主要由油酸、棕榈酸等组成。部分NEFA被肝脏吸收后发生氧化分解以提供能量，但过量的NEFA则酯化为甘油三酯（triglycerides，TG）并沉积在肝脏组织中，导致脂肪肝。现有研究显示，NEFA与肝细胞的脂代谢紊乱密切相关，然而尚不明确NEFA具体通过哪些代谢物或代谢通路影响肝细胞的脂代谢紊乱。因此，本研究旨在借助脂质组学方法和分子生物学技术，探究高浓度NEFA对肝细胞脂代谢的作用，明确奶牛脂肪肝的发病机制，为奶牛脂肪肝的防控提供理论依据。 通过向体外培养的小鼠AML-12细胞中添加NEFA，构建脂肪肝细胞模型。除对照组外，其余四组分别添加终浓度为0.3、0.6、1.2、2.4 mM NEFA，作用12 h后，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测各组细胞活力，油红O染色测定各组细胞内脂滴含量，TG试剂盒测定各组细胞内TG含量，探究NEFA的最适添加浓度，随后以该浓度构建脂肪肝细胞模型。使用实时荧光定量PCR（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）检测对照组与实验组细胞中脂质代谢相关分子肉毒碱棕榈酰转移酶1 A（carnitine palmitoyl transferase 1 A，CPT1A）、激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase，HSL）和脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FASN）的mRNA表达量的差异。最后，收集对照组和实验组的细胞样品，进行脂质组学分析，深入挖掘NEFA调控的差异代谢物及代谢通路。研究结果如下： （1）CCK-8实验结果表明，与对照组相比，0.3 mM NEFA对肝细胞活力没有显著影响，而0.6、1.2、2.4 mM NEFA组肝细胞活力显著降低，且呈浓度依赖性。 （2）TG含量测定结果表明，与对照组相比，0.3、0.6、1.2 mM NEFA可显著促进肝细胞TG含量的升高，且呈浓度依赖性。同时，油红O染色结果显示，对照组肝细胞生长状态良好，细胞核呈现蓝紫色，细胞中存在极少脂滴。然而，在NEFA处理后，细胞中出现大量脂滴，且随着NEFA浓度的升高，脂滴数量增多、体积变大。0.3 mM NEFA和0.6 mM NEFA处理组细胞中脂滴面积占总面积的百分比高于对照组细胞中的百分比，1.2 mM NEFA处理组细胞大部分死亡，视野内可见细胞碎片，2.4 mM NEFA处理组细胞全部死亡，无法观察到细胞结构。这些结果说明，0.6 mM NEFA可显著降低肝细胞活力，并促进肝细胞的脂质蓄积。综合上述结果，选用0.6 mM NEFA构建脂肪肝细胞模型。 （3）qPCR结果显示，与对照组相比，0.6 mM NEFA组细胞中脂质生成相关分子FASN的mRNA表达量显著升高，脂质分解相关分子CPT1A和HSL的mRNA表达量显著降低。 （4）脂质组学结果分析发现，0.6 mM NEFA组肝细胞脂质组学特征与空白对照组相比存在明显差异，共存在107种显著差异的代谢物，包括77个上调的代谢物和30个下调的代谢物，其中差异最显著的9种代谢物分别为LPE（18:2）、LPE（18:3）、LPE（18:1）、PE（36:3）、LPE（20:0）、DAG（38:4）、LPE（20:3）、PE（34:1）、LPE（22:6）。进一步将107种差异代谢物进行KEGG信号通路富集分析，得到5条与脂质代谢相关的差异性代谢通路，包括甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成、甘油酯代谢、鞘脂代谢、肌醇磷酸代谢。 综上所述，0.6 mM NEFA可显著降低肝细胞活力，促进TG蓄积，促进脂质生成分子FASN 的mRNA表达量并抑制脂质分解分子CPT1A和HSL的mRNA表达量。通过脂质组学分析结果进一步发现，0.6 mM NEFA能够通过调控甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成、甘油酯代谢、鞘脂代谢、肌醇磷酸代谢这些代谢通路诱导肝细胞脂代谢紊乱的发生。 |
| 并列题名： | Lipidomics-based Study of the Effect and Mechanism of High Concentration NEFA on Lipid Metabolism Disorders in Hepatocytes eng |
| 题名主题： | 脂肪肝 非酯化脂肪酸 脂质代谢 脂质组学 学位论文 |
| 中图分类： | S856-533 |
| 个人名称等同： | 蔡金音 著 |
| 个人名称次要： | 李小兵 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240520 |