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： 石斛红茶组方促进骨健康的机制及安全性研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 石斛红茶组方促进骨健康的机制及安全性研究/.赵云丽著/.盛军指导 |
| 出版发行项： | 2019.06.13 |
| 载体形态项： | 120页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 随着人口老龄化的不断加剧，骨质疏松症已成为影响中老年人生活质量的“流行病”，给社会尤其是医疗保健体系带来了沉重的压力。石斛和茶叶作为云南的两大特色植物资源，因其多种生物学功能而备受研究者关注。本实验室前期研究结果表明，石斛和红茶单用均具有改善骨质疏松的作用，但同时存在局限；基于此，本课题进行了石斛红茶颗粒促进骨健康作用的研究，以全面阐述石斛红茶联用组方增加骨密度、改善骨质疏松症的研究思路及结果，并深入挖掘石斛和红茶的生理活性，为将其开发成为有助于促进骨健康的保健食品提供技术支撑。 本研究选取石斛粉和红茶提取物，应用U5(54)均匀实验设计，对正常小鼠灌胃给予石斛红茶组方，获得含受试物血清，运用血清药理学方法，以观察对破骨形成的影响，从中优选出抑制破骨细胞生成的最佳配比；进一步，选择去势雌性小鼠模型观察血中激素及钙（Ca）、磷（P）等水平的变化。结果：成功建立50ng/mL RANKL诱导的体外破骨细胞形成模型；两因素五水平均匀实验结果提示石斛粉与红茶提取物按5 : 2的配比灌胃给予小鼠28天，子宫系数明显增加（P<0.05），其血清可明显抑制破骨细胞的形成，在五组实验中活性较好。采用优选出的配比组方对去势小鼠以0.84g/kg剂量连续灌胃28天，可增加模型小鼠子宫和股骨系数，与对照组相比差异显著（P<0.05/0.01）；可明显增加去势后血Ca含量，降低ALP水平（P<0.05/0.01）；可调整雌/雄激素的比值，表明具有雌激素样作用；实验确定了石斛和红茶的最佳配比为5 : 2，其起效剂量为0.84g/kg。 采用L9（34）正交实验设计研究了红茶水提物的影响因素，选择多糖和咖啡因含量作为石斛红茶颗粒的质控指标，综合评价石斛红茶组方工艺的可行性。结果表明：确定石斛经打粉机粉碎成粗粉，过60目，粉碎机械不限；红茶提取工艺为：80℃条件下，温浸3次，每次1h，每次加水量为20倍、15倍、15倍进行浸提，其中茶黄素含量为0.57%，总体工艺稳定可行。质控成分检测结果表明：石斛红茶组方中多糖含量为31.23%，咖啡因含量为1.97%，其测定方法简单可行、重复性好。石斛红茶颗粒最优制备工艺条件为：16目筛制粒、14目筛整粒；以木糖醇作为辅料，90%乙醇为最优润湿剂；总混时间为20min；干燥时间为1-2h，水分含量在5%以内；最后过60目筛，除去小于60目的颗粒，得干颗粒。在此条件下，生产的石斛红茶颗粒均匀、硬度适中、无沉淀、口感较好，各项指标符合颗粒剂的生成要求。 建立摘除卵巢致大鼠骨质疏松症模型，分别从骨密度、骨矿盐含量、子宫和股骨系数、T淋巴细胞亚群、细胞因子、激素水平以及骨病理学变化等方面，综合评价石斛红茶组方连续12周给予摘除卵巢致大鼠骨质疏松模型的影响，综合评价其对骨质疏松症大鼠的改善情况。结果：石斛红茶组方以0.84g/kg剂量连续灌胃12周给予摘除卵巢SD大鼠，能明显增加模型动物子宫系数（P<0.05）、股骨系数（P<0.05），以及骨密度和骨矿盐含量（P<0.05）；改善骨皮质疏松和骨小梁链接程度（P<0.05）；增加血Ca、E2以及骨保护素（OPG）水平（P<0.05）水平；降低血清中RANKL、ALP活性和破骨细胞刺激因子白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和Ⅰ型胶原N端前肽（PINP）含量（P<0.05/0.01）；同时石斛红茶组方通过降低大鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD4+数目（P<0.05）、增加CD8+数量（P<0.01），调节CD4+和CD8+比值，改善免疫失衡。提示石斛红茶组方能改善雌性去势大鼠的骨质疏松状况。 机制探索分别采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹（Western Blot）法观察石斛红茶组方对破骨相关特异性基因和蛋白表达的影响。结果：经石斛红茶组方50、100μg/mL干预后，破骨细胞的分化形成被抑制，而对正常RAW264.7细胞增殖无影响；PCR结果显示破骨细胞生成相关基因c-Fos、整合素β3（β3-Integrin）、组织蛋白酶K（Cathepsin K,Catk）、基质金属蛋白酶（MMP-9）、活化T细胞核因子c1（NFATc1）、c-Src、和TRAP mRNA的表达水平降低；同时Western Blot结果显示c-Fos、Cathepsin K和NFATc1蛋白的表达也明显下降(P<0.05/0.01)，其中以对c-Fos蛋白的下调作用最为明显，表明石斛红茶组方可调节破骨细胞的生成、活性和骨吸收功能。推测其进一步的分子机制可能与Jak-STAT信号通路相关。 安全性评价采用小鼠急性毒性试验，正常SD大鼠重复灌胃13周、恢复观察2周毒性试验以及去势雌性SD大鼠连续灌胃13周毒性试验观察石斛红茶组方的毒性反应、作用靶器官及可逆性。试验结果表明：在本实验条件下，石斛红茶组方以5g/kg剂量每天两次灌胃给予小鼠，未发现明显急性毒性反应和死亡，其最大耐受量（MTD）大于10g/kg，为推荐服用剂量的12.5倍。石斛红茶组方以1.0、2.0、4.0g/kg剂量连续灌胃给予正常SD大鼠13周、恢复观察2周，体重增长较对照组有缓慢趋势，但无统计学差异（P>0.05），推测可能与每天两次灌胃高浓度受试物影响营养吸收有关；灌胃末期，4.0g/kg剂量组纤维蛋白原（FIB）含量和血小板（PLT）数量较对照组呈降低趋势（P>0.05），推测与石斛改善血液循环的活性有关；血清谷草转氨酶（AST）降低及ALP有升高趋势（P>0.05），但无毒理学意义；其一般状况、进食和饮水、脏器系数、血液学和主要生化指标、肝肾病理学检查与对照组相比均无明显变化。以0.84g/kg剂量重复灌胃给予去势大鼠13周，模型组大鼠体重较对假手术组明显增加（P<0.01），而石斛红茶组方组动物体重较模型组明显降低（P<0.05/0.01），推测可能是由于石斛红茶组方的激素调节作用所致；各组均未出现与供试品相关的死亡和中毒现象；其一般状况、周摄食量、饮水量等与对照组比较均无统计学差异（P>0.05）；取材测定各指标未见大鼠血液、生化和脏器系数等与对照组有统计学意义（P>0.05）；肝肾病理组织学检测也未见异常改变。提示本实验条件下，石斛红茶组方对正常动物及骨质疏松模型动物均未见与供试品相关的毒性反应。 通过本研究有以下结论： （1） 本研究制备的石斛红茶颗粒制备工艺方便可行，标志性成分明确，质量稳定可控。 （2） RANKL通过激活NFATc1和c-fos的转录活性，进而促进破骨细胞的生成，增强破骨细胞的活性。100μg/mL石斛红茶组方通过抑制破骨细胞生成相关基因以及蛋白的表达，进而抑制破骨细胞的生成、活性和骨吸收功能，推测其分子机制可能与Jak-STAT信号通路有关。石斛红茶组方对类似绝经后骨质疏松的大鼠模型有提高骨密度及骨矿盐含量的作用，可防止骨微结构的破坏，改善骨质疏松的症状。 （3） 安全性试验结果表明石斛红茶组方对正常动物和疾病模型动物安全性较好。 |
| 并列题名： | The study of mechanism and safety of Dendrobium candidum and black tea extract combination on promoting bone health eng |
| 题名主题： | 石斛红茶组方 骨质疏松 破骨细胞 功能与机制 安全性评价 学位论文 |
| 中图分类： | R589.5-533 |
| 个人名称等同： | 赵云丽 著 |
| 个人名称次要： | 盛军 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200316 |