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： 三种植物病原菌噬菌体分离及抑菌活性评价
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 三种植物病原菌噬菌体分离及抑菌活性评价/.杞丽红著/.张仕颖指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.8 |
| 载体形态项： | 80页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 资源与环境学院, 学号2020210259 |
| 提要文摘： | 面对日益严峻的细菌抗生素抗性问题，噬菌体作为解决策略的研究成为了新热点。由于植物致病菌的复杂性和多样性，急需获得更多抑菌效果优越的烈性噬菌体。本研究以青枯菌复合种也称青枯菌（Ralstonia solanacearum，RSSC）、水稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae）、洋葱泛菌（Pantoea allii）为宿主分离噬菌体。对噬菌体生物学特性和基因组进行分析，并评价它们的体外抑菌活性。 通过稀释涂布平板法从烟草根际土壤中分离获得菌株Petrs-1，特异性引物扩增和16S rRNA基因系统发育分析显示Petrs-1属于Ralstonia solanacearum。经鉴定，菌株Petrs-1为青枯菌演化型Ⅰ，生理小种1，生化变种3。分别以Petrs-1和实验室保存的YIMB22001、YIMB22002为宿主采用双层琼脂平板法分离到4株青枯菌噬菌体：Ptrsv-1、YIMV22001、YIMV22002和YIMV22003。噬菌体Ptrsv-1呈二十面体，直径57.50±3.9nm，基因组大小为42739bp，GC含量为57.37%，含有54个ORF。噬菌体YIMV22001具多面体头部与尾部结构，头部直径51.79±2.1nm，尾部长138.99±4.9nm，基因组大小为50153bp，GC含量为64%，含有68个ORF。噬菌体YIMV22002呈二十面体，直径54.16±3.4nm，基因组大小为37420bp，GC含量为63%，含有54个ORF。YIMV22003头部具典型的二十面体，直径70.37± 6.3nm，有短小的尾部，长30.73±11.2nm，基因组大小为44346bp，GC含量为61%，含有57个ORF。对4株青枯菌噬菌体的ORF进行注释，注释到的功能包括结构蛋白，核酸复制、转录、修饰、组装、整合酶及裂解酶，ORF都注释到了整合酶，证明4株噬菌体都属于温和噬菌体。形态特征、系统发育分析、全基因组分析等结果表明噬菌体Ptrsv-1和YIMV22003属于有尾病毒纲（Caudoviricetes）下的Beephvirinae，噬菌体YIMV22001和YIMV22002属于有尾病毒纲中的新类群。 通过点滴法以水稻黄单胞菌HRL1为宿主从水稻叶片中分离到1株噬菌体Xohv-1。噬菌体Xohv-1具有长尾（长165.27±3.50nm），头部呈现二十面体（直径62.15±3.5nm），24h的噬菌斑大小为8+0.2mm，最佳MOI为100，潜伏期约为10min，爆发期约为20min，爆发量28.33PFU/cell。Xohv-1对温度、pH、紫外具有良好的耐受性，Xohv-1基因组大小为43678bp，GC%为50.55%，含有63个ORF。ORF注释到包括结构蛋白，核酸复制、转录、修饰、组装、烈解酶等功能，未注释到整合酶，结合生物学特性和抑菌实验证明噬菌体Xohv-1为裂性噬菌体。全基因组系统发育分析显示Xohv-1独立成簇。根据VIRIDIC计算的病毒基因组间相似性推测Xohv-1属有尾病毒纲下的Xipdecavirus。 通过点滴法以水稻黄单胞菌HRL2为宿主从水稻叶片中分离到1株噬菌体噬菌体YIMV22004，噬菌体YIMV22004具有短小尾部，长38.89±3.9nm，头部呈二十面体，头部直径53.2+0.1nm，含有52个ORF。ORF注释到包括噬菌体结构蛋白、核酸复制、转录、组装及裂解酶等功能，未注释到整合酶，结合生物学特性证明噬菌体YIMV22004为烈性噬菌体，24h形成的噬菌斑大小为0.7±0.3mm。噬菌体YIMV22004与现有病毒基因组差异较大，末端酶大亚基氨基酸序列系统发育分析显示其独立成簇，推测属于有尾病毒纲中的新类群。ORF功能注释未注释到整合酶基因，结合生物学特性和抑菌实验证明噬菌体YIMV22004为烈性噬菌体。 噬菌体Xohv-1对宿主HRL1在72h内以不同的MOI（0.001~100）进行实验均能显著抑制宿主增殖。噬菌体YIMV22004对宿主HRL2以MOI=100进行实验，在16h内均能显著抑制宿主增殖。噬菌体YIMV22004对宿主HRL1在96h内以不同的MOI（0.001~100）进行实验均能显著抑制宿主增殖，在120h内以不同MOI（0.001~10）进行实验均能显著抑制宿主增殖。噬菌体YIMV22004和Xohv-1对宿主生物膜的形成都有显著抑制作用。 本研究分离获得6株噬菌体，扩充了植物病原菌噬菌体库，为噬菌体制剂的开发奠定了基础。其中噬菌体Xohv-1潜伏期短，生物学特性稳定，具有良好的体外抑菌活性，在治疗水稻黄单胞菌导致的水稻白叶枯病具有潜在的应用前景。 |
| 并列题名： | Isolation and Bacteriostatic Characteristics of Phages Infecting Three Plant Pathogenic Bacteria eng |
| 题名主题： | 青枯菌复合种 水稻黄单胞菌 洋葱泛菌 噬菌体 抑菌活性 学位论文 |
| 中图分类： | S435.6-533 |
| 个人名称等同： | 杞丽红 著 |
| 个人名称次要： | 张仕颖 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240516 |