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： 草果生物碱的制备及其通便作用机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 草果生物碱的制备及其通便作用机制研究/.张云翠著/.高晓余指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.27 |
| 载体形态项： | 84页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 食品科学技术学院, 学号2021240127 |
| 提要文摘： | 便秘是由于胃肠道传导功能失常引起的常见病症。该病的发病机制是一个多系统参与、多因素调控的过程。便秘的发生常常伴随着多种并发症的发生。目前治疗便秘的药物毒副作用强，长期使用易破坏肠道微生态系统，加重便秘程度。许多天然植物中的有效活性成分具有维持肠道功能稳态的作用，是理想的通便功能剂和微生态调节剂，被认为是治疗便秘的候选药物。 草果（Amomum tsaoko）为姜科豆蔻属草本植物，主要含有黄酮类、生物碱类等多种活性成分，具有调节胃肠道功能、降血糖等功效。本课题组前期研究发现，草果水提物和水提醇溶物均有显著的通便作用。通过广泛靶向代谢组学分析发现草果水提醇溶物中生物碱相对丰度较高，推测其可能是通便的重要组分。为此，本研究通过响应面法对超声辅助提取草果生物碱的工艺进行优化，并结合有机溶剂法萃取草果生物碱，使用大孔树脂对其进行纯化和制备；在此基础上，利用洛派丁胺诱导的慢传输型便秘小鼠模型来评价草果生物碱的通便活性，并进一步借助RT-qPCR、ELISA和16S rRNA基因高通量测序等技术方法，揭示草果生物碱的通便作用机制。主要结果如下： （1）通过单因素试验优化了草果生物碱的检测方法为：样品液1 mL，缓冲溶液为pH值为2.0的磷酸盐2 mL，溴甲酚绿300 μL，氯仿萃取液1 mL，无水硫酸钠0.5 g，混匀后静置30 min，取氯仿层于410 nm处检测。 （2）通过响应面法对超声辅助提取草生物碱的工艺进行优化提取条件为：乙醇浓度为65%，料液比为1:12，超声功率160W，有机溶剂萃取酸性溶液pH值为4.0，碱性溶液pH值为10.0，该工艺条件下，草果生物碱的提取率为0.818%。通过单因素试验优化了草果生物碱的纯化工艺条件为：选用HP-20型树脂纯化草果粗生物碱，最佳的上样浓度为2 mg/mL，上样液的pH值为4，上样体积为6 mL，置于摇床（25℃，150 r/min）静态吸附7 h，洗脱乙醇浓度为45%-75%，洗脱液用量为9 BV；在此条件下获得的草果生物碱含量为43.0%。 （3）动物实验结果表明，草果生物碱能够显著缩短便秘小鼠的首粒黑便时间（P<0.01），增加便秘小鼠的粪便含水率、粪便数量和重量，显著提高便秘小鼠的小肠墨汁推进率（P<0.001），以高剂量组（150 mg/kg）效果最佳。 （4）草果生物碱显著下调便秘小鼠血清中AchE的表达水平（P<0.01）、上调血清中5-HT的表达水平，显著上调结肠组织中AchE和5-HT4R受体的mRNA表达水平（P<0.05），显著上调结肠组织中干细胞因子SCF、c-Kit和smMLCK的mRNA表达水平（P<0.01）；此外，草果生物碱干预后，结肠CX43、MLCK、RYR3的mRNA表达呈上升趋势。表明草果生物碱能够改善便秘小鼠的胃肠动力功能障碍，增加肠道转运率。 （5）草果生物碱能显著下调促炎因子IL-1β的mRNA表达水平（P<0.05），同时下调TNF-α的mRNA表达水平，显著上调黏蛋白Muc2的mRNA表达水平（P<0.05）；此外，结肠中肠道屏障因子Occludin、Claudin4、ZO-1的基因表达呈上升趋势。表明草果生物碱能改善便秘小鼠的肠道炎症和肠道屏障，维持肠道内稳态平衡。 （6）肠道菌群与草果生物碱改善洛哌丁胺诱导的便秘症状有关。本研究发现草果生物碱能显著改善便秘小鼠肠道菌群的物种组成和结构。将差异微生物类群与宿主表型指标和功能基因表达之间建立相关性，发现几种特殊的差异微生物与改善宿主参数具有显著的相关性。在科水平上，Lactobacillaceae、norank_o_Clostridia_vadinBB60_group、Lachnospiraceae、Monoglobaceae、Peptococcaceae与宿主表型指标和功能基因表达之间存在极强的相关性；在属水平上，Monolglobus、Lactobacillus、norank_f_norank_o_Clostridia_vadinBB60_group、norank_f_Peptococcaceae与宿主参数存在极强的相关性。值得提及的是，这些菌群与宿主参数之间的联系在一定程度上解释了草果生物碱对便秘小鼠的系统性影响，从肠道微生态角度揭示了草果生物碱对便秘小鼠肠道菌群的调控作用。 （7）PICRUSt 2功能预测结果表明，草果生物碱可能通过肠道菌群影响氨基酸代谢、脂质代谢、细胞生长凋亡和循环系统等进而改善便秘小鼠症状。 综上所述，本研究响应面法对超声辅助提取草果生物碱的工艺进行优化，并结合有机溶剂萃取法提取草果生物碱，通过大孔树脂法对其进行纯化和制备，得到含量较高的草果生物碱。将其应用到洛哌丁胺诱导的慢传输型便秘小鼠模型上，发现草果生物碱具有显著的通便活性，它可能通过调控便秘小鼠的肠道运动、肠道炎症、肠道屏障和肠道菌群等方面达到良好的通便效果。本研究的发现有助于开发以草果为原料的食疗通便食品，进一步为草果的开发奠定基础，带动云南草果产业的发展。 |
| 并列题名： | Study on the Preparation of Amomum Tsaoko Alkaloids and Its Laxative Mechanism eng |
| 题名主题： | 草果生物碱 分离纯化 通便机制 肠道菌群 学位论文 |
| 中图分类： | TS201-533 |
| 个人名称等同： | 张云翠 著 |
| 个人名称次要： | 高晓余 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240603 |