书目详细信息
： 奶山羊肠道主要病原菌的分离鉴定及多重qPCR检测方法的建立
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 奶山羊肠道主要病原菌的分离鉴定及多重qPCR检测方法的建立/.张登俊著/.段纲， 常华指导 |
| 出版发行项： | 2023.06.01 |
| 载体形态项： | 70页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240465 |
| 提要文摘： | 产气荚膜梭菌、沙门氏菌和志贺氏菌是奶山羊养殖场主要病原菌，临床病例中两种或两种以上混合感染的情况比较常见。为了解石林地区奶山羊养殖场主要肠道病原菌，提供快速诊断技术。试验对该地区养殖场采集的粪样进行细菌分离鉴定，并建立针对产气荚膜梭菌、沙门氏菌和志贺氏菌单一病原的TaqMan探针qPCR检测方法和针对产气荚膜梭菌、沙门氏菌、志贺氏菌的三重qPCR检测方法。 1.主要病原菌分离鉴定 对来自石林地区奶山羊养殖场的34份粪便样本，通过细菌的培养特性、形态学鉴定、生化鉴定、16S rRNA测序鉴定。主要分离到大肠杆菌，产气荚膜梭菌、志贺氏菌、沙门氏菌、粪肠球菌、胆汁肠球菌、不动杆菌、金黄色葡萄球菌；通过动物回归试验发现产气荚膜梭菌，志贺氏菌，沙门氏菌为主要致病菌。 2.分别建立3种主要致病菌TaqMan探针qPCR检测方法 通过对产气荚膜梭菌16S rDNA部分基因设计引物和探针，建立产气荚膜梭菌qPCR检测方法，最佳扩增条件退火温度56℃，退火延伸30 s，标准曲线为y=-3.43x＋41.14，相关系数为1.000，效率是95.72%，最低样品检测浓度3.19 copies/µL；通过对沙门氏菌FimY基因设计引物和探针，建立沙门氏菌qPCR检测方法，最佳扩增条件退火温度56℃，退火延伸30 s，标准曲线为y=-3.23x＋40.29，相关系数0.999，扩增效率是103.92%，最低样品检测浓度6.33 copies/µL；通过志贺氏菌IpaH基因设计引物和探针，建立志贺氏菌qPCR检测方法，最佳扩增条件退火温度56℃，退火延伸30 s，标准曲线为y=-3.45x＋39.90，相关系数0.998，效率是94.88%，最低样品检测浓度为2.96 copies/µL；以上3种检测方法灵敏性都比普通PCR高100倍以上；利用养殖场常见细菌DNA检验方法的特异性，对照孔没有扩增，说明该检测方法的特异性较好。 3.产气荚膜梭菌、沙门氏菌、志贺氏菌三重qPCR检测方法的建立 三种细菌质粒标准品10倍梯度稀释，在单项荧光定量检测方法的基础上优化引物和探针浓度组合。在退火温度56℃，退火延伸50 s时，建立的三重检测方法产气荚膜梭菌标准曲线关系式为y=-3.59x＋42.11，相关系数0.999，扩增效率为89.80%，最低检出限为50 copies/µL；沙门氏菌标准曲线关系式为y=-3.29x＋38.01，相关系数0.999，扩增效率为101.16%，最低检出限为10 copies/µL；志贺氏菌标准曲线关系式为y=-3.32x＋38.18，相关系数1.000，扩增效率为100.20%，最低检出限为10 copies/µL。三重qPCR检测方法各检测项都得到较好的扩增效率，且特异性较好；以104 copies/µL~108 copies/µL五个浓度梯度的标准品进行组间和组内重复实验，结果具有较好的重复性和稳定性。 本研究为奶山羊肠道主要致病菌的快速诊断提供了技术支持。 |
| 并列题名： | Isolation and identification of major intestinal pathogens in dairy goats and establishment of multiplex qPCR detection methods eng |
| 题名主题： | 产气荚膜梭菌 沙门氏菌 志贺氏菌 实时荧光定量PCR 学位论文 |
| 中图分类： | S858.27-533 |
| 个人名称等同： | 张登俊 著 |
| 个人名称次要： | 段纲 指导 |
| 个人名称次要： | 常华 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |