提要文摘: | 为了了解犬细小病毒抗原型在昆明市的流行情况,从昆明市宠物医院收集疑似犬细小病毒粪便病料9份。通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到5份疑似犬细小病毒。对5份疑似犬细小病毒样品进行PCR与qPCR鉴定、IFA鉴定、血凝效价测定、TCID50测定、电镜形态学观察、病毒理化特性实验、病毒拷贝数趋势绘制以及VP2序列测定分析。结果显示,分离的5株病毒均能使F81产生明显的细胞病变(CPE),PCR扩增产物大小为164 bp,IFA鉴定感染的F81细胞出现绿色荧光,血凝效价为两株1:64、三株1:128,TCID50为10-4.375/0.1 mL,VP2基因PCR扩增条带大小均为1755 bp,在电镜下观察到符合CPV形态的病毒样粒子,病毒理化特性符合CPV特性,病毒拷贝数趋势为随天数增加先上升后趋于平稳。通过VP2结构蛋白分析测序表明,分离到的犬细小病毒抗原型4株为CPV-2a型、1株为CPV-2型,均属于变异株,与参考毒株比对后分别有4、6、6、6、7个氨基酸位点发生非同义替换。分离株之间VP2核苷酸同源性介于98.5% ~99.7%,氨基酸同源性介于97.1% ~ 99.5%;分离株与GenBank国内分离株之间VP2核苷酸同源性介于98.0% ~99.6%,氨基酸同源性介于94.9% ~99.7%;分离株与疫苗株之间VP2核苷酸同源性介于98.4% ~99.4%,氨基酸同源性介于97.1% ~ 98.8%,其中英特威疫苗与分离株核苷酸与氨基酸同源性均最高,说明英特威疫苗对CPV的保护效果较好。进化树分析表明分离的相同抗原型的犬细小病毒与国内流行株位于同一簇,变异程度较低。该研究为昆明市犬细小病毒的流行情况及病原特征提供理论依据,为犬细小病毒病的预防提供帮助。
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