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： 云南地区人参果病毒病病原鉴定及茎尖脱毒技术的研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 云南地区人参果病毒病病原鉴定及茎尖脱毒技术的研究/.侬永纳著/.吴红芝指导 |
| 出版发行项： | 2023.05.15 |
| 载体形态项： | 53页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 园林园艺学院, 学号2021240208 |
| 提要文摘： | 人参果具有丰富的营养价值，含有人体所需的多种营养元素，具有食用、药用、保健、观赏价值等。2021年，石林县人参果种植面积达10 420 hm2。目前云南省的人参果种植已经发展成为以石林为中心，陆良、弥勒、泸西、元谋等多个地区辐射发展的大产业。然而由于人参果种植多年采用扦插等无性繁殖方式，因此极易受病毒侵染。人参果受到病毒侵染后会出现植株矮化、花叶、叶片皱缩、果实僵硬等症状。人参果一旦感染病毒，则终身带毒，造成持久性的危害，最终导致人参果品种退化、果实品质参差不齐、商品质量下降等，造成巨大的经济损失。 目前，对于病毒病的防治尚没有一种有效的药物，因此，鉴定侵染人参果病毒病原和探索一种适宜人参果脱毒的方法具有非常重要的现实意义。本研究通过田间调查，建立人参果组织培养快繁体系，并以得到的人参果无菌苗为病毒病原鉴定与脱毒研究的材料，根据前人已报导的侵染人参果的病毒种类，设计病毒的特异性PCR引物，通过PCR扩增，研究侵染人参果的病毒种类和适宜脱毒方法。主要研究结果如下： （1）外植体消毒及无菌系建立：以人参果幼嫩单芽为外植体，设计0.1%的氯化汞的消毒时间为10 min、12 min、15 min、18 min，进行外植体消毒方案的筛选，结果显示最适合人参果外植体消毒的方案是自来水冲洗40 min，75% 的酒精消毒30 s，无菌水漂洗3次，放入0.1%的氯化汞中浸泡12 min，再用无菌水漂洗5次，成活率为63.33%、死亡率为13.33%、污染率为23.33%，与其他处理具有显著差异；将经过消毒处理的人参果外植体接种于不同浓度激素配比的MS培养基中，筛选不同激素配比对人参果外植体诱导的影响，结果显示最适宜人参果外植体诱导培养基为不加激素的MS培养基，诱导率为93.33%，显著高于其他处理。 （2）人参果无菌苗的继代增殖：将获得的人参果无菌苗接种于不同浓度激素配比的MS培养基中，结果显示最适人参果继代培养的培养基是MS+NAA1.5 mg/L+6-BA0.05 mg/L+肌醇0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L，pH=6.5，人参果株高可达70.25 mm、茎粗可达1.35 mm、叶片数可达12.25片、叶长可达25.00 mm、叶宽可达12.00 mm，显著高于其他处理组。 （3）病毒病的鉴定：根据已报告的侵染人参果的病毒：马铃薯M病毒(PVM)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Ｙ病毒(PVY)、苜蓿花叶病毒(AMV)、烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯H病毒(PVH)、番茄花叶病毒(ToMV)、烟草脉带花叶病毒(TVBMV)、辣椒叶脉黄化病毒(PeVYV)、草莓潜隐环斑病毒(SLRSV)和凤果花叶病毒(PepMV)，设计特异性引物，通过RT-PCR检测鉴定，发现待测人参果无菌苗上带有TVBMV、PeVYV、ToMV、PVM四种病毒。 （4）茎尖分生组织的分化诱导：剥取0.2-0.5 mm的人参果茎尖接种于不同浓度激素配比的MS培养基中进行茎尖分生组织诱导，结果显示最合适人参果茎尖诱导的培养基为MS+NAA0.05 mg/L+6-BA0.5 mg/L+肌醇0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L，pH=6.5，诱导植株生长健壮，诱导率达93.33%，显著高于其他处理组。 （5）脱毒处理：对检测出的4种病毒进行脱毒处理，运用茎尖培养脱毒、温度处理结合茎尖培养脱毒、化学处理结合茎尖培养脱毒三种方法，其中无菌苗直接剥取茎尖培养，茎尖成活率为97.5%；温度处理后人参果无菌苗成活率、剥取茎尖培养茎尖成活率最高的是36 ℃处理，无菌苗成活率与茎尖成活率都是86.67%，显著高于其他处理；不同浓度的病毒唑处理后人参果无菌苗成活率、剥取茎尖培养茎尖成活率最高的是25 mg/L浓度的病毒唑处理，无菌苗成活率与茎尖成活率分别为90.83%和90.11%，显著高于其他处理。 （6）脱毒效果检测：通过TR-PCR检测，脱除TVBMV与PeVYV最好的方法是培养基中添加45 mg/L浓度的病毒唑培养人参果无菌苗20 d后剥取0.2-0.5 mm茎尖培养，脱毒率为88.89%，显著高于其他处理；脱除PVM最好的方法是40 ℃高温处理8 d再在组培室培养10 d后剥取0.2-0.5 mm茎尖培养，脱毒率为48.32%，显著高于其他处理；微茎尖培养、热处理与茎尖培养、病毒唑与茎尖培养三种脱毒方法都未能脱除ToMV。 |
| 并列题名： | Research on Pathogen Identification of Solanum Muricatum Virus Disease and Stem Tip Detoxification Technology in Yunnan eng |
| 题名主题： | 人参果 病毒病 组织培养 RT-PCR检测 茎尖脱毒 学位论文 |
| 中图分类： | S663.9-533 |
| 个人名称等同： | 侬永纳 著 |
| 个人名称次要： | 吴红芝 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |