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Toll样受体(Toll like receptors，TLRs)是目前发现能调控机体免疫反应的一类重要模式识别受体，不仅能识别病原微生物调控免疫应答反应，启动固有免疫机制，其引发的信号通路还能引起适应性免疫反应的活化。而MyD88(myeloid differentiation factor88，MyD88)则是Toll信号通路中的关键转接分子，它能募集下游相关受体激酶完成信号通路传导，在动物免疫调控中发挥重要作用。本研究分析了红嘴鸥MyD88基因及该基因编码蛋白的一系列生物信息学，构建其原核表达载体，制备兔抗MyD88多克隆抗体，对MyD88蛋白在DF-1细胞中的表达和定位进行了研究，为进一步研究野生候鸟MyD88蛋白在固有免疫中的作用提供技术支持。
通过对MyD88蛋白疏水性、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、糖基化位点的预测和分析，发现该基因编码的蛋白不存在跨膜区和信号肽结构，含25个潜在的磷酸化位点，6个糖基化位点，33个稀有密码子，预测主要定位在细胞质中。
将实验室已扩增获得的红嘴鸥MyD88基因PCR产物，克隆至pMD18-T载体中并进行测序验证，结果显示成功获得红嘴鸥MyD88基因的T克隆载体。通过双酶切的方法将正确克隆的红嘴鸥MyD88基因正向插入到原核表达载体pET32a^（＋）中，成功构建了重组表达质粒pET32a-MyD88。将正确亚克隆质粒转化到BL21、BL21（DE3）、BL21（DE3）PLySs 、Transetta（DE3）表达宿主菌中，经宿主菌的选择和诱导表达条件的优化，得知在37℃下经终浓度为1mmol / L的IPTG体外诱导5h，重组蛋白可以在Transetta（DE3）中得到高效表达，能表达出大小约为54kD的重组蛋白pET32a-MyD88，并主要以包涵体的形式存在。
通过包涵体洗涤、过Ni（NTA Beads 6FF）离子柱纯化后，将获得的高纯度表达蛋白和弗氏佐剂等量混匀并乳化用作免疫原免疫新西兰大白兔。最后获得兔抗重组蛋白pET32a-MyD88多克隆抗体，通过蛋白A重力层析柱纯化血清IgG。Western blotting试验结果显示获得兔抗重组蛋白pET32a-MyD88的特异性抗体IgG。
为进一步研究红嘴鸥MyD88蛋白的表达和功能，我们用脂质体转染法将构建好的pcDNA3.1 (+) -MyD88真核表达质粒转染到DF-1细胞，收集转染后0~48h的玻片。用间接免疫荧光的方法，对细胞进行固定和透化处理后，用一抗（纯化后的兔抗IgG）、二抗（FITC标记的羊抗兔IgG）进行孵育，经DAPI核染后用激光共聚焦荧光显微镜观察MyD88蛋白在DF-1细胞中的表达和定位，结果显示pcDNA3.1 (+) -MyD88质粒能在DF-1细胞中表达，发现MyD88主要定位于DF-1细胞的细胞质中。