书目详细信息
： 发酵灯盏花对PRV感染小鼠三叉神经节细胞保护作用研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 发酵灯盏花对PRV感染小鼠三叉神经节细胞保护作用研究/.潘琼著/.舒相华指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.31 |
| 载体形态项： | 51页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210419 |
| 提要文摘： | 灯盏花具有抗炎、保护神经细胞、提高免疫力等作用。现代中药发酵技术可提高灯盏花有效成分含量。伪狂犬病病毒（PRV）具有高度嗜神经性，主要潜伏在三叉神经节（TG）中，应激条件下可重新激活导致动物发病并传播，猪感染会出现明显的神经症状。本研究通过建立发酵灯盏花工艺，建立PRV感染小鼠三叉神经节细胞体外模型，比较发酵前后灯盏花粗黄酮在TG细胞上抑制PRV活性，为灯盏花抗病毒药物研究提供理论依据。 1. 灯盏花发酵工艺建立和优化 建立高效液相色谱（HPLC）法检测灯盏花成分，根据灯盏乙素和灯盏乙素苷元含量变化，从10种外源菌和2种自诱导（厌氧、好氧）发酵方式中筛选最优发酵菌种；采用单因素和响应面试验，以灯盏乙素苷元含量为指标优化料液比、时间、温度、氮含量和碳含量发酵条件。结果：灯盏乙素和灯盏乙素苷元标准曲线分别为y=2E-06x - 0.5253和y=2E-07x + 0.3392，线性关系良好，精密度、稳定性、重复性和加样回收率符合要求；12种发酵产物灯盏乙素含量较原药均极显著降低（P＜0.01），自诱导厌氧发酵方式灯盏乙素苷元含量为17.86 mg/g，较原药和其余发酵组极显著升高（P＜0.01）；优化发酵工艺为：料液比1:8.4、时间6 d、温度36.5℃、氮含量0.19%、碳含量0.22％，此工艺灯盏乙素苷元含量为27.88 mg/g，与原药组比较提高20.35倍。 2. TG原代细胞的分离鉴定及PRV感染模型构建 采用组合酶消化乳鼠三叉神经节制备TG原代细胞，观察细胞生长情况；采用间接免疫荧光法检测卫星胶质细胞、星型胶质细胞、神经元和PRV特异性抗体在原代细胞中的表达；接种PRV观察细胞病变效应（CPE）；Reed-Muench法计算病毒TCID50。结果：小鼠TG细胞24 h贴壁，4~5 d生长成熟；卫星胶质细胞、星型胶质细胞、神经元和其它细胞、PRV特异性抗原阳性率分别是65%、3%、8%、24%和100%。PRV感染TG细胞24 h出现CPE，72 h 细胞病变率达90%；PRV-XD-F3毒株对BHK细胞和TG细胞的半数感染量分别为10-9.71/0.1 mL和 10-5.12/0.1 mL。 3. 发酵灯盏花粗黄酮对PRV的体外抑制活性研究 采用CCK-8法测定原药和发酵灯盏花粗黄酮对TG细胞最大安全浓度和对PRV的最小抑制浓度，计算治疗指数（TI）；通过CCK-8法和qPCR法测定并计算原药和发酵灯盏花粗黄酮在阻断、抑制和直接毒杀作用下的细胞保护率和对病毒载量的影响；采用Western blot法分别测定PRV、发酵粗黄酮、PRV+发酵粗黄酮对TG细胞TLR4/MYD88/NF-κB p65蛋白在0、12、24、36和48 h表达情况的影响。结果：原药组和发酵组对TG细胞的最大安全浓度分别为15 mg/mL和35 mg/mL，对PRV的最小抑制浓度分别为0.47 mg/mL和0.23 mg/mL，TI值分别为31.91和152.17； 阻断作用下，原药和发酵灯盏花粗黄酮保护率均为负值，病毒拷贝数仅2 mg/mL和4 mg/mL发酵灯盏花较PRV组显著降低（P＜0.05）；抑制作用下，原药和发酵灯盏花粗黄酮对细胞保护率分别为-2.36%~35.09%、57.60%~74.17%，病毒拷贝数均小于PRV组；直接毒杀作用下，原药和发酵灯盏花粗黄酮对细胞保护率分别为70.08%~102.94、91.40%~108.03%，病毒拷贝数均显著小于PRV组（P＜0.05），抑制和毒杀作用方式下两种药物保护率均随浓度增加而增加，病毒拷贝数随浓度增加而减少，相同浓度下发酵组保护率显著大于原药组（P＜0.05），病毒拷贝显著小于原药组（P＜0.05）。与空白组比较，PRV对TG细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白调控呈上调-下调再上调趋势；FEF组和FEF+RRV组对细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白均呈先上调后下调趋势，在36 h和48 h除TRL4蛋白外显著低于PRV组（P＜0.05）。 综上所述，建立灯盏花自诱导厌氧发酵工艺，优化后显著提升灯盏乙素苷元含量为原药的20.35倍；发酵灯盏花粗黄酮具有抗PRV活性且优于原药材，主要通过抑制病毒复制和直接毒杀方式呈剂量依赖性发挥作用；发酵灯盏花粗黄酮可在36~48 h抑制PRV引起的TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达上调。 |
| 并列题名： | Study on the Protective Effect of Fermented Breviscapine on Mice Trigeminal Ganglion Cells Infected by Pseudorabies Virus eng |
| 题名主题： | 灯盏花 发酵 伪狂犬病毒 三叉神经节原代细胞 学位论文 |
| 中图分类： | R285.5-533 |
| 个人名称等同： | 潘琼 著 |
| 个人名称次要： | 舒相华 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240520 |