书目详细信息
： ‘滇红’月季RhD14基因克隆与功能研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | ‘滇红’月季RhD14基因克隆与功能研究/.杜高齐著/.孟静，李雪娇指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.12 |
| 载体形态项： | 73页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 园林园艺学院, 学号2020210205 |
| 提要文摘： | 月季（Rosa hybrida L.）是世界四大切花之首，其观赏价值主要体现在花型、花色和株型等方面。月季株型决定了花叶的整体布局、株形及修剪成本等，其中侧枝是地上株型的重要组成部分，直接决定月季产量、品质和生产效率等。因此探究月季侧枝发生机制和高效调控方式极具理论和生产价值。月季侧枝发生受遗传因子、环境因素、植物激素等多种因素影响，而植物激素在其中扮演了重要角色，在侧枝调控方面具有重要作用。独脚金内酯（Strigolactones，SLs）作为新型调控侧枝发育的激素，将为研究月季侧枝发生提供新的方向与思路。 Dwarf 14（D14）是应答 SLs 信号的底物受体，编码该蛋白的基因是参与 SLs 信号转导途径的关键基因。‘滇红’（Rosa hybrida ‘Dianhong’）是目前云南广泛栽培的月季食用品种，但是该品种植株顶端优势强、侧枝较少，限制其花朵产量和经济效益的提高，生产上急需侧枝调控技术和优良株型新品种。为探究 RhD14 基因的功能，本研究克隆‘滇红’ RhD14基因 cDNA 序列，并进行生物信息学分析，同时采用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测其在不同组织及去顶处理下的基因表达情况，利用烟草瞬时转化系统对 RhD14 基因编码蛋白进行亚细胞定位；构建过表达载体，并通过农杆菌介导遗传转化拟南芥，期望通过观察表型及相关基因表达量的变化来探索RhD14 基因在侧枝调控方面可能存在的作用机制。研究结果如下： （1）克隆获得的 RhD14 基因（GenBank登录号：OP009358）cDNA序列为1094 bp，包含完整开放阅读框（ORF），长度为1045 bp，编码347个氨基酸残基，蛋白质分子式为 C1738H2703N441O510S15，相对分子量为38.41 kDa，理论等电点（pI）为5.71，α- 螺旋和 Cc（无规则卷曲）为其氨基酸序列的主要二级结构，且RhD14为无跨膜螺旋结构和信号肽的稳定蛋白，属于 α/β 水解酶家族。同源序列比对和系统进化树分析结果表明，RhD14 氨基酸序列（OP009358）与同属的月季氨基酸序列（XP024283944.1）相似性最高为98.05％，其次是同亚科的草莓（XP_004287076.1），相似性为89.75％，三者亲缘关系较近。与同科的杏仁（BBH08393.1）、桃（XP_007202641.2）、梅（XP_008242593.1）、欧洲甜樱桃（XP_021807166.1）和苹果（XP_008386980.2）的D14氨基酸序列相似性也较高，为73.20％~73.97％。 （2）RhD14 基因在‘滇红’根、茎、叶、腋芽、节、顶芽中均有表达，以根为对照组，发现 RhD14 基因在茎中的表达量最高，极显著高于其在根中的表达量（P < 0.01）。通过 qRT-PCR 测定茎和腋芽中 RhD14 基因的表达量，发现去顶后该基因显著上调表达，均于去顶处理后12 h达到峰值后下降。表明去顶处理能够显著（P < 0.05）诱导 RhD14 基因在茎和腋芽中的表达，以调控月季腋芽的萌发和生长。 （3）将RhD14与过表达载体pC1300s-35S-GFP载体连接，成功构建含卡那霉素和潮霉素抗性的过表达载体pC1300s-35S-RhD14-GFP，并转入到根癌农杆菌GV3101中，利用农杆菌介导法瞬时侵染本氏烟草叶片。结果显示，RhD14编码蛋白位于细胞质和细胞膜上，与WOLF PSORT预测结果一致。 （4）阳性植株鉴定：本研究以哥伦比亚野生型拟南芥种子为试验材料，获得8株转化再生植株，6株鉴定为T1代阳性植株，收种播种后，产生T2代转基因纯合植株。将筛选出的纯和株系继续培养，同时对T2代转基因纯合植株进行DNA和RNA鉴定，阳性转化率为 88.89 %。为进一步考察RhD14基因在转基因植株中的表达情况，通过qRT-PCR检测初步鉴定的部分转基因植株RhD14基因相对表达量，发现不同植株间RhD14基因的表达存在差异；相对于WT植株，转基因植株的RhD14基因相对表达量分别高出77.53、33.04和24.64倍。对相关表型指标进行统计发现，RhD14基因参与调控拟南芥根系、莲座叶、茎粗、株高的生长以及果荚的大小和成熟。对相关基因检测后发现RhD14转基因植株中AtD14基因较WT表达不显著，但极显著促进AtSMXL7基因的表达，且转基因植株中GA信号转导途径AtGID1A基因也极显著上调表达。 |
| 并列题名： | Cloning and functional study of RhD14 gene from Rosa hybrida ‘Dianhong’ |
| 题名主题： | ‘滇红’月季 RhD14基因 克隆 遗传转化 功能研究 学位论文 |
| 中图分类： | S688-533 |
| 个人名称等同： | 杜高齐 著 |
| 个人名称次要： | 孟静 指导 |
| 个人名称次要： | 李雪娇 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |