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： 云南烟草丛顶病病原物RT-qPCR检测方法及主要病原物在烟草体内的分布
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 云南烟草丛顶病病原物RT-qPCR检测方法及主要病原物在烟草体内的分布/.谭松涛著/.李凡指导 |
| 出版发行项： | 2018.06.04 |
| 载体形态项： | 64页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 云南烟草丛顶病（Yunnan tobacco bushy top disease，YTBTD）是由多种病原物复合侵染引起并对烟草生产造成重大损失的一类烟草病害。YTBTD的病原物主要有以下4种，番茄丛矮病毒科（Tombusviridae）幽影病毒属（Umbravirus）的烟草丛顶病毒（Tobacco bushy top virus，TBTV），烟草丛顶病毒卫星RNA（Tobacco bushy top virus satellite RNA，TBTV-SatRNA）、黄症病毒科（Luteoviridae）马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）的烟草扭脉病毒（Tobacco vein distorting virus，TVDV）以及烟草扭脉病毒相关RNA（Tobacco vein distorting virus associated RNA，TVDVaRNA）。自然情况下，TBTV需要TVDV的帮助才能进行蚜虫传播，而TBTV对于烟草丛顶病症状的产生有着至关重要的作用。目前关于幽影病毒属病毒和黄症病毒科病毒的互作研究主要集中在黄症病毒协助幽影病毒进行蚜虫传播的机制方面，而对于黄症病毒和幽影病毒的互作场所以及幽影病毒复制机制的相关研究较少。 本研究首先建立了云南烟草丛顶病4种病原物的实时荧光定量RT-PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测技术，4种病原物的RT-qPCR检测引物的扩增效率分别为：TBTV 97.5%，TVDV 97.3%，TBTV-SatRNA 92.7%，TVDVaRNA 97.7%，说明所建立的检测技术扩增效率较高，可用于YTBTD 4种病原物的检测以及对不同病原物在植物或介体昆虫体内相对含量的分析，为烟草丛顶病不同病原物之间的互作机制研究提供了一种新的技术手段。运用该检测技术对YTBTD典型发病烟草植株内TBTV、TVDV、TBTV-SatRNA和TVDVaRNA等4种病原物的相对含量进行检测分析，结果表明TVDV在感病烟草植株内的相对含量最少，TBTV-satRNA的相对含量最高，为TVDV的25.37倍，TBTV的相对含量为TVDV的4.42倍，TVDVaRNA的相对含量为TVDV的3.65倍。 通过dsRNA结合蛋白和双分子荧光互补技术（Bimolecular flurescence complementation，BiFC），对TBTV和TVDV的dsRNA在烟草组织间和亚细胞进行定位，发现TBTV主要存在于烟草的叶肉细胞以及初生韧皮部，TVDV主要存在于烟草的维管束组织的初生韧皮部和韧皮薄壁细胞中，推测TBTV和TVDV的识别和互作可能主要是在烟草的初生韧皮部中进行。对TBTV的dsRNA进行亚细胞定位，结合染病组织超薄切片观察，发现TBTV侵染的烟草细胞叶绿体内部出现直径300-500 nm左右球形结构，结构内出现丝状物，该结构同时在向叶绿体外部释放直径90 nm左右内含丝状物的小球形结构现象。结合对TBTV的dsRNA定位结果，推测该300-500 nm大小的球形结构可能是TBTV的病毒复制复合体（Viral replication complexes，VRCS）。 感病植物的症状表型与细胞超微结构的变化存在着必然联系，为了探明烟草丛顶病感病烟草植株的细胞超微结构变化，本研究对单独感染TBTV、TVDV以及同时感染了YTBTD的4种病原物这3种类型的烟草植株分别制备超薄切片进行电镜观察，对染病组织的细胞超微结构变化进行了描述，对TBTV和TVDV在染病组织中造成的细胞结构病变及其在烟草丛顶病症状形成中的关系进行了分析。TBTV侵染早期的烟草叶片往往有坏死斑的产生，感病细胞内叶绿体崩解、产生大量小囊泡。TVDV单独接种普通烟K326不产生明显外部症状，推测其内在原因可能是因为单独感染TVDV的烟草细胞叶绿体基粒片层结构及叶绿体膜基本保持完整，主要细胞器结构完整且能正常行使功能，未出现细胞器裂解现象。而4种YTBTD病原物侵染的典型烟草丛顶病症状样品组织的细胞超微结构中，出现叶绿体崩解、线粒体裂解、髓鞘样结构和细胞自噬体，与健康对照植物相比，YTBTD 4种病原物感染的组织中细胞器减少，细胞的正常生理活动受到影响，可能导致叶片出现坏死斑、植物长势变弱、植株变矮、叶片黄化等症状。 综上所述，本研究构建了云南烟草丛顶病4种病原物的RT-qPCR检测技术，首次阐明了TBTV和TVDV在感病烟草体内的分布情况，推测TBTV和TVDV的识别和互作场所位于烟草初生韧皮部。首次发现并描述了TBTV的复制复合体结构及复制场所。对YTBTD染病植株的细胞超微结构变化进行了观察分析，从细胞病变角度，初步揭示了YTBTD的病原物与症状形成的关系。 |
| 并列题名： | Establishment of RT-qPCR Detection Method for the Causal Agents and Distribution of the Main Viruses in Tobacco Tissues of Yunnan Tobacco Bushy Top Disease eng |
| 题名主题： | 烟草丛顶病 烟草丛顶病毒 烟草扭脉病毒 复制复合体 亚细胞定位 RT-qPCR 学位论文 |
| 中图分类： | S432.1-533 |
| 个人名称等同： | 谭松涛 著 |
| 个人名称次要： | 李凡 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20190505 |