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书目详细信息： 辣木肽螯合钙的制备、结构解析及预防骨流失作用机制研究

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《辣木肽螯合钙的制备、结构解析及预防骨流失作用机制研究》

ISBN/价格：	CNY40.00 (估)缴送
作品语种：	chi
出版国别：	CN 530000
题名责任者项：	辣木肽螯合钙的制备、结构解析及预防骨流失作用机制研究/.代佳和著/.盛军, 田洋指导
出版发行项：	2020.06
载体形态项：	110页:;+图表:;+30cm
一般附注：	食品科学技术学院
提要文摘：	（1）辣木蛋白提取工艺优化。以辣木叶干粉为原料，分析超声波功率、超声时间、提取温度、水浴时间和溶液pH值，6个因素对辣木叶水溶性蛋白提取率的影响，在单因素的基础上，以响应面优化酸法提取辣木蛋白的最佳工艺条件。得到最优提取条件为料液比1:70（g:mL）、超声波功率300 W、超声时间30 min、浸提水浴温度53℃、溶液pH 1.4、浸提水浴时间60 min，此条件下的水溶性蛋白提取率最高，可达（79.36±1.13）mg/g。其中对辣木叶蛋白提取率的影响依次为溶液pH>料液比>超声时间>水浴温度。（2）MORP-Ca的制备及稳定性分析。通过酶解制备辣木多肽（MORP），以肽钙螯合率为评价指标，分析钙肽比、螯合温度、螯合时间、螯合pH值，4个因素对肽钙螯合率的影响，在单因素的基础上，以正交试验优化MORP-Ca的最佳制备工艺条件。五种酶筛选结果显示，碱性蛋白酶水解所得多肽得率为71.97%，钙螯合能力为71.33%，酶解效果优于中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶；筛选出最适螯合条件为钙肽比为1:5（m:m），螯合pH值为7.0，螯合温度50 ℃，螯合时间40 min，最佳条件下肽钙螯合率可达72.19%；且分子量小于1 kDa的MORP，钙螯合效果最好，螯合率为72.94%；在该螯合条件下，制备得到的MORP-Ca在pH6.0~8.0范围内，钙保留率维持在作用前的90%以上，高温处理后钙保留率仍可达到85%以上，经胃蛋白酶、胰蛋白酶共同作用后，钙保留率保持在80%以上。（3）MORP-Ca的结构表征。紫外-可见光谱（UV-vis）、荧光光谱（FS）、傅里叶变换红外光谱（FTIR）、扫描电镜（SEM）、能谱（EDS）用于表征钙离子螯合前后MORP结构的变化，质谱用于解析分子量小于1 kDa的MORP的氨基酸序列。结果显示，钙螯合后MORP的UV-vis、FS、FTIR均发生了变化，可能是由于MORP中的-COOH，-OH和-NH₂基团参与Ca²⁺的配位，形成MORP-Ca；SEM 和EDS检测结果显示，螯合后MORP结构变得更疏松，并有絮状物附着，且螯合后钙原子占比从0.25%增加到5.93%，表明钙螯合后MORP的外观和内部结构均发生了变化。对分子量小于1 kDa的MORP进行氨基酸序列解析，鉴定出23种对钙具有高亲和力的肽。并发现大部分多肽序列末端为Lys，小部分为Arg，并且在部分肽段中重复了Leu-Ala，Gly-Phe，Val-Cly和Leu-Leu序列。（4）体外MORP-Ca的促钙吸收作用及骨细胞代谢调控。进一步通过体外建立Caco-2细胞单层模型、破骨细胞模型和MG-63成骨细胞模型，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、免疫印迹（Western Blot）、抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）、噻唑蓝染色（MTT），以探索MORP促钙转运机制及对骨细胞代谢的调控作用。结果显示，MORP-Ca和CaCl₂的存在均可引起细胞内Ca²⁺的增加，培养120 min后MORP-Ca转运能力显著高于CaCl₂（P < 0.05），呈显著剂量依赖增加趋势；MORP及MORP-Ca处理后，Caco-2细胞中TRPV6，calbindin-D9k和PMCA1b基因及蛋白表达水平均显著增加（P < 0.05）。此外，MORP-Ca干预后，MG-63成骨细胞表现出增殖活性, 浓度为0.2 mg/mL时增殖效果优于0.4 mg/mL；在该浓度范围的MORP-Ca对破骨细胞的分化形成起到抑制作用，并显著下降破骨细胞生成相关蛋白非受体络氨酸激酶（c-Src）、活化T细胞核因子c1（NFATc1）的表达（P < 0.05），其中NFATc1蛋白的下调作用更明显。表明，MORP主要通过激活跨细胞吸收途径中的TRPV6钙离子通道起到促钙转运作用；同时，MORP-Ca可调节成骨细胞和破骨细胞的生成、活性和骨吸收功能，推测进一步的分子机制可能与JaK-STAT信号通路有关。（5）MORP-Ca体内钙生物利用度及预防钙缺乏大鼠骨流失作用。以钙缺乏SD大鼠模型为研究对象，按照 200 mg/kg 体重的剂量对SD大鼠连续灌胃8周，4周时进行体内钙生物利用度试验；8周结束，检测大鼠心、肝、脾、肺、肾脏系数及血液学指标，采用双能X射线检测大鼠骨密度（BMD），测定骨Ca含量，番红固绿染色股骨组织，观察皮质骨厚度及骨小梁面积，通过体内实验进一步综合评价MORP-Ca改善缺钙引起的骨流失作用。结果显示，MORP-Ca组钙吸收率和储留率显著高于相同剂量CaCO₃组（P < 0.05）；缺钙8周大鼠体重显著降低（P < 0.05），补充MORP-Ca能有效缓解钙缺乏导致的体重降低（P < 0.05），对大鼠心脏、肝脏、脾、肺、肾脏系数无显著影响（P > 0.05），并可调节缺钙引起的总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）水平降低（P < 0.05）；同时，补充MORP-Ca对股骨长度变化无显著影响（P > 0.05），但可降低钙缺乏引起的ALP、PTH水平升高（P < 0.05），显著增加血清Ca含量、股骨湿重、骨钙含量及股骨BMD（P < 0.05），改善皮质骨厚度及骨小梁结构（P < 0.05）。提示MORP-Ca能增加钙利用率，并改善缺钙引起的大鼠骨流失状况。
并列题名：	The effect and mechanism of roburic acid targeting TNF-α to suppress colorectal cancer
题名主题：	辣木叶蛋白肽肽钙螯合物结构表征促钙吸收骨流失学位论文
中图分类：	TS255.5-533
个人名称等同：	代佳和著
个人名称次要：	盛军指导
团体名称等同：	云南农业大学授予
记录来源：	CN YNAUL 20210506

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