书目详细信息
： 昆虫细胞表达赤羽病病毒G1截短蛋白及其免疫原性研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 昆虫细胞表达赤羽病病毒G1截短蛋白及其免疫原性研究/.胡世享著/.陈培富，艾军指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.25 |
| 载体形态项： | 61页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210415 |
| 提要文摘： | 赤羽病（Akabane，AVA）是由赤羽病病毒（Akabane Virus ，AKAV）引起牛和羊的一种虫媒传染病，该病在热带和温带的许多国家和我国大部分地区广泛流行，给世界畜牧业造成巨大的经济损失。该病毒为单股负链 RNA 病毒，其基因组由 L(6868 nt)、M (4309 nt)、S (858 nt)3个基因节段组成。在病毒的结构蛋白中，由M基因节段编码的G蛋白是诱导产生中和抗体的主要保护性抗原，也是在变异比较大的结构蛋白。为防控国内赤羽病，有必要构建基于重组G蛋白的血清抗体检测方法。 本研究利用生物信息学软件分析G1基因，筛选抗原性优势的肽段，结果显示抗原指数较高区域为1-80aa、140-180aa、189-397aa、300-400aa和560-620aa；综合分析该蛋白质的理化性质，截短表达189-397aa肽段蛋白为亲水性蛋白，抗原表位亲水性强，容易与抗体相识别结合，具有较好的稳定性，跨膜区预测显示该蛋白存在跨膜区，推测该蛋白主要以包涵体形式存在；该蛋白存在多个潜在的磷酸化位点，推测可能与细胞内信号转导和蛋白定位有关系，且该片段二级结构中β折叠与无规则卷曲所占比例较高，提示该蛋白具有形成抗原表位的结构基础，β转角一般作为凸出结构位于蛋白质位置表面，容易产生扭曲结构并形成抗原表位，从而易与抗体结合。表位预测结果表明该截短片段免疫原性得分较高，存在丰富的潜在抗原表位。 通过PCR扩增、酶切、连接、转化等步骤，克隆Thr189-Val397对应的目的基因片段G1-2。将该片段插入昆虫杆状病毒表达载体pFastBacTMHTB，再将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞，得到重组穿梭质粒Bacmid-AKAV-G1-2，用 Cellfectin Reagent Ⅱ介导转染sf9细胞，表达重组蛋白。以AKAV抗体阳性血清为一抗，HRP标记的兔抗山羊为二抗，做Western-blot法检测，显示分子量约为27 KDa的预期蛋白反应条带，表明重组G1-2蛋白表达成功，且能被特异性抗体识别。为初步评价重组截短蛋白的免疫原性，用Bacmid-AKAV-G1-2重组蛋白和AKAV种毒（对照）作为免疫原分别免疫小鼠，进一步测定分析重组蛋白和天然病毒抗原诱导的抗体水平，利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定免疫后小鼠血清，结果显示蛋白抗原及天然病毒抗原均可以诱导抗体产生，重组蛋白抗原在免疫后第三周开始产生抗体，而天然病毒抗原在第二周便开始产生抗体，且特异性抗体效价较高。 综上所述，本研究利用昆虫细胞表达出具有与天然蛋白质构象接近、具有免疫原性的G1-2蛋白，可作为ELISA检测AKAV血清抗体的包被抗原，并有望作为防控AKA的亚单位疫苗候选抗原。 |
| 并列题名： | Expression and Immunogenicity Study of Truncated G1 Protein of Akabane Disease virus in Insect CellsExpression and Immunogenicity Study of Truncated G1 Protein of Akabane Disease virus in Insect Cells |
| 题名主题： | 赤羽病病毒 G1-2截短蛋白 昆虫细胞 免疫原性 学位论文 |
| 中图分类： | Q962-533 |
| 个人名称等同： | 胡世享 著 |
| 个人名称次要： | 陈培富 指导 |
| 个人名称次要： | 艾军 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |