书目详细信息
： 猫肠道益生芽孢杆菌的分离鉴定及体外活性分析
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 猫肠道益生芽孢杆菌的分离鉴定及体外活性分析/.周坤著/.陈培富指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.31 |
| 载体形态项： | 75页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240449 |
| 提要文摘： | 猫是越发受欢迎的伴侣动物之一，2022年我国养猫增量超过犬，保持猫的健康成为宠物行业关注的重点。肠道菌群被视为“代谢活性器官”，与猫健康密切相关。研究显示，肠道菌群紊乱会影响猫健康。自国家农业农村部实施“减抗、禁抗”以来，宠物益生菌的开发利用备受关注，益生菌不仅能够提高猫养分表观消化率，还能降低腹泻率。猫是专性食肉动物，肠道微生物菌群结构与犬不尽相同，从猫肠道内分离出的益生菌对猫肠道益生作用可能更明显，然而大多数宠物市售益生菌制剂都是犬猫共用，对猫源益生菌的分离和活性研究较少，故有必要明确猫源益生菌的种类并对其代谢产物益生活性进行分析，筛选利于猫肠道长期健康的益生菌，为开发新型猫用功能性饲料添加剂提供候选的益生菌株。 本研究拟筛选抗逆性较强的芽孢杆菌作为益生菌候选株。共采集95份猫样（肛拭子、直肠拭子和粪便），选用TSB肉汤增菌和TSA平板纯化培养，首先将样品高温处理并涂板，挑选疑似芽孢杆菌的单菌落进行染色镜检，符合生物学形态特征的芽孢杆菌用于后续体外试验研究。通过观察菌落形态和镜检结果，从猫肠道中分离出芽孢杆菌，同时以分离自益生菌产品的芽孢杆菌作为对照。随后以大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌作为指示菌株，采用牛津杯法对芽孢杆菌发酵液进行体外抑菌试验，并结合发酵液的总酸度值对芽孢杆菌进行初筛。进而通过细菌传统鉴定方法（生理生化）配合16S rRNA和gyrA基因对分离菌株进行鉴定、分组，对芽孢进行体外产酶、生长能力及抗逆性测定，对营养体进行抗生素敏感性检测，并通过微生物非靶向组学方法对芽孢杆菌代谢产物分析。 结果显示，分别从样品和商品中分离出芽孢杆菌90株和3株；初筛获得15株对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑制作用的芽孢杆菌；发酵液均偏酸性（pH5.85±0.5）；菌株生长稳定期OD600值为1.177±0.2；从分离的15株样品菌和3株商品菌中鉴定到1株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、1株为高位芽孢杆菌(Bacillus allegius)、2株为贝勒森芽孢杆菌(Bacillus Belleterson)、4株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformus)、10株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；菌株3-1体外产蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶的能力较强，菌株4-2、4-3、5-3、13、16产淀粉酶和纤维素酶的能力较强，菌株1-5、8-6、X2产淀粉酶和蛋白酶的能力较强，菌株2-3、9-5产蛋白酶，菌株14-2产淀粉酶；芽孢在高温、低酸及胆盐条件下的生存率分别为90.53%、81.25%、85.66%；15株芽孢杆菌除对氨苄西林(AMP)耐受外，对临床上常用的抗生素（氨基糖苷类、β-内酰胺类、大环内酯类、四环素类、喹诺酮类和酰胺醇类）敏感性较高，其中菌株4-2、10、13敏感性最高。综合比较，实验组中菌株2-3、3-1、4-2、5-3、8-6、9-5、14-2、16益生活性较强，对照组中菌株X2益生活性较强。总体上，实验菌株体外抑菌作用和抗逆性比X2强，产酶能力与X2相近。本项目基于液相色谱四级杆串联飞行时间质谱仪（LC-QTOF）平台，以TSB肉汤为空白对照N，对上述18个分离菌株的培养滤过液进行微生物非靶向代谢组学定性和定量分析，共检测到12992个峰，其中注释到2397个代谢物，主成分分析（PCA ）显示菌株B1、B5、B6、B7、B10、B12、B13和B14第一主成分和第二主成分均高于N，菌株B2、B3、B4、B8、B9、B11、B15和C2第一主成分均高于N，菌株C1、C3、B13第二主成分均高于N。京都基因与基因组百科全书（KEGG库）共注释到1433种代谢途径，其中被注释最多的代谢途径为抗生素和有机物的生物合成及氨基酸的代谢。人类代谢组学数据库（HMDB库）共注释到1288种物质，其中有机物共1283种，主要为有机酸、脂类物质和碳水化合物。脂质代谢途径(Lipidmaps)库共注释到394种物质，主要有脂肪酸、烯类物质和酯类物质。KEGG、HMDB、Lipidmaps三个库共注释到174种有机物，有机酸有45种(25.86%)，细菌素17种(9.77%)，氨基酸11种(6.32%)。 菌株B1、B2、B4、B5、B7、B8、B9、B13、B15、C2相比N上调有机物数分别为54、66、50、53、57、53、56、54、39、54，菌株B2、B4、B5、B7、B8、B9、B13、B15相比菌株C2上调有机物数分别为34、20、19、21、6、26、22、14。 研究结果表明，筛选出具有抑菌作用、抗逆性强、产酶能力好的15株芽孢杆菌，符合益生菌的筛选标准。通过代谢组学检测到芽孢杆菌能产生多糖、有机酸、氨基酸、多肽、短链脂肪酸、细菌素、脂类和酯类物质等多种益生物质。其中B2、B4、B5、B7、B8、B9、B13、B15这8株芽孢杆菌益生活性较好，可作为研发猫肠道微生态制剂的候选菌株。 |
| 并列题名： | Isolation, identification and in vitro activity analysis of probiotic Bacillus spp. from feline intestine eng |
| 题名主题： | 猫 芽孢杆菌 代谢产物 益生活性 学位论文 |
| 中图分类： | S829.3-533 |
| 个人名称等同： | 周坤 著 |
| 个人名称次要： | 陈培富 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240529 |