书目详细信息
： 云南撒坝猪源大肠杆菌WHR噬菌体的分离与lysin基因的表达及活性研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 云南撒坝猪源大肠杆菌WHR噬菌体的分离与lysin基因的表达及活性研究/.高飞龙著/.高洪指导 |
| 出版发行项： | 2019.6.6 |
| 载体形态项： | 61页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 为了研究大肠杆菌噬菌体及裂解酶对大肠杆菌的裂解作用。本研究进行了以撒坝猪源大肠杆菌为宿主的裂解性噬菌体的分离和纯化、裂解谱的鉴定和生物学特性研究、噬菌体裂解酶基因的表达及重组蛋白菌内、外活性的检测。本试验采用双层琼脂平板法，以大肠杆菌为指示菌自云南楚雄州某规模化养殖场采集的粪便中分离出一株裂解性噬菌体，经增殖纯化后测定其效价和裂解谱；通过测定 WHR 噬菌体地热稳定性，pH 稳定性，最佳感染复数和一步生长曲线了解其生物学特性；根据 T4-like 噬菌体的尾鞘蛋白gp 18和主要衣壳蛋白gp 23相关基因的保守区序列设计引物，利用 PCR 技术扩增得到 WHR 噬菌体gene 18和gene 23保守区基因，并通过序列同源性分析、绘制进化树来鉴定 WHR 噬菌体；利用冷休克表达载体 pCold 表达噬菌体裂解酶lysin并检测其活性。结果发现：（1）分离得到的噬菌体具有较高的效价，达到109 pfu/ mL以上，噬菌体针对不同血清型大肠杆菌的裂解率为69.57 %，完全裂解率为28.26 %，表明其裂解谱较广，为一株宽泛噬菌体（WHR噬菌体）。（2）在60 ℃作用30 min后， WHR 噬菌体效价仍高于106 pfu/ mL，在pH 5~9范围内作用16 h，效价保持在108 pfu/ mL以上，所以 WHR 噬菌体具有较强的的热稳定性和 pH 耐受性。WHR 噬菌体裂解宿主菌的最佳感染复数为 10-6，一步生长曲线表明WHR噬菌体感染宿主菌的潜伏时间约为30 min，爆发时间约为120 min，计算得裂解量为41 pfu/ cell。（3）通过 PCR 扩增得到的gene 18和gene 23片段分别为1330 bp和845 bp，同源性分析显示 WHR 噬菌体gene 18和gene 23与 T4 噬菌体相应部分的核苷酸同源性分别为42.6 %和95 %，WHR 噬菌体gene 18与大肠杆菌噬菌体slur 07的同源性最高，达到95.3 %；与大肠杆菌噬菌体slur 03和slur 08的同源性次之。WHR 噬菌体gene 23与噬菌体slur 14的同源性最高，达到98 %，与 T4和T2 噬菌体的分别为91.9 %和96.2 %。应用生物信息学软件，分别构建基于gene 18和gene 23核苷酸序列的 T4-like 噬菌体的系统进化树，WHR 噬菌体gene 18和gene 23分别与噬菌体slur 07和slur 14遗传距离最近，属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科 T4-like 噬菌体。（4）本试验将WHR噬菌体裂解酶基因 lysin 连接至表达载体 pCold 上，并成功地表达了目的蛋白。活性检测实验结果显示重组蛋白具有菌内裂解活性，但菌外裂解活性实验得到了阴性的结果。结果表明：本试验成功分离得到一株 WHR 噬菌体，且分离到 WHR 噬菌体裂解谱较广、裂解能力较强且对理化因素的耐受力较强，其裂解酶基因 lysin 表达产物具有菌内裂解活性。预示着在预防和治疗大肠杆菌感染方面WHR噬菌体具有潜在的应用前景。 |
| 并列题名： | Isolation of Escherichia coli WHR Phage from Yunnan Saba Pig and the Expression and Activity of Lysin Gene |
| 题名主题： | 噬菌体 多重耐药菌 分类鉴定 生物信息学分析 噬菌体裂解酶 学位论文 |
| 中图分类： | S852.659.1-533 |
| 个人名称等同： | 高飞龙 著 |
| 个人名称次要： | 高洪 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |