书目详细信息
： SLC17A8基因对兰坪乌骨绵羊黑色素形成的影响
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | SLC17A8基因对兰坪乌骨绵羊黑色素形成的影响/.岳丹著/.邓卫东指导 |
| 出版发行项： | 2022.05.30 |
| 载体形态项： | 78页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院,学号2019210309 |
| 提要文摘： | 黑色素属于潜在的营养物质，而兰坪乌骨绵羊因大量黑色素沉积而闻名。前人的研究表明黑色素的形成受多基因调控，尽管大量研究探讨了基因与黑色素形成的关联，但影响黑色素的主效基因尚不清楚。为探究兰坪乌骨绵羊黑色素形成的营养代谢机理，本试验以本课题组前期全基因组关联分析（GWAS）筛选出的SLC17A8基因作为候选基因，选取100只兰坪乌骨绵羊作为研究对象和50只普通绵羊作为对照。紫外可见光谱法测定绵羊血液TYR活力、血浆比色、总黑色素、真黑色素/总黑色素、脱黑色素和碱溶性黑色素指标；设计11对特异性引物对绵羊类群SLC17A8基因12个外显子及其侧翼区进行PCR扩增，对SLC17A8蛋白进行生物信息学预测；分析SLC17A8基因多态性与兰坪乌骨绵羊黑色素特征的关联性；同时，利用CRISPR/Cas9系统基因敲除技术对SLC17A8基因于斑马鱼上进行敲除。主要实验结果如下： 1.?兰坪乌骨绵羊除总黑色素和脱黑色素外，其他黑色素指标含量均显著（P?<0.05）高于普通绵羊。兰坪乌骨绵羊和普通绵羊血浆TYR活性分别为377.010±21.910 IU/mL和321.522±10.702 IU/mL；碱溶性黑色素含量分别为0.163±0.010 OD/mL和0.189±0.005 OD/mL；真黑色素与总黑色素的比例分别为0.320±0.010和0.251±0.004。 2.?兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因CDS序列全长1770 bp，编码589个氨基酸，SLC17A8蛋白是主要定位于细胞质膜的疏水性非分泌型跨膜蛋白。不同物种SLC17A8基因编码区核苷酸序列具有较高的保守性，与普通绵羊进行序列比对同源性达99.38%。在6个外显子区共发现11个碱基突变，其中发现两个错义突变位点：第一外显子的G159A位点（Exon1-G159A）编码的氨基酸由甘氨酸（Gly）突变到谷氨酸（Glu），第二外显子的G87A位点（Exon2-G87A）编码的氨基酸由Gly突变到精氨酸（Arg），其余9个位点均为同义突变。蛋白结构预测显示，SLC17A8蛋白空间结构主要由α螺旋和无规则卷曲构成，其中112个氨基酸参与延伸链（e）。 3.?绵羊等位基因频率及基因型频率统计分析显示，除了Exon2-G87A位点和兰坪乌骨绵羊Exon11-T271C位点偏离Hardy-Weinberg平衡（P?<0.05）外，其他位点均处于平衡状态（P?>0.05）。在Exon4-C149T位点兰坪乌骨绵羊与普通绵羊基因型分布存在极显著差异（P?<0.01）；Exon2-A150C、Exon7-C181T以及Exon11-T271C绵羊基因型分布均差异显著（P?<0.05）；其余7个位点基因型分布差异不显著（P?>0.05）。兰坪乌骨绵羊和普通绵羊Exon1-C139T位点以及普通绵羊Exon1-G159A、Exon2-A150C、Exon4-C149T、Exon7-T195C和Exon12-C173T位点均存在一个纯合子未检测出，且Exon1、2、4和7上有多位点突变，表明群体遗传性正在遭到破坏并可能存在同外显子多位点协作调控黑色素转运。 4.?将兰坪乌骨绵羊与普通绵羊SLC17A8基因的11个多态位点的基因型与血浆中黑色素含量指标进行关联分析，结果显示Exon1-C139T位点CC型绵羊TYR活力显著高于CT型绵羊，Exon1-G159A位点GA型兰坪乌骨绵羊TYR活力以及GA型普通绵羊真黑色素/总黑色素指标显著高于其他基因型，Exon2-G87A位点上AA型兰坪乌骨绵羊TYR活力显著高于GG型和GA型，Exon4-T158C和Exon7-T195C位点TT型兰坪乌骨绵羊TYR活力显著高于其他基因型；并且在不同绵羊群体间CC、GA、AA、TT型兰坪乌骨绵羊TYR活力均显著高于普通绵羊。因此，CC、GA、AA和TT型为兰坪乌骨绵羊的优势基因型。 5.?36 h测序突变样本与参考序列拟合程度为0.82，基因编辑后indel百分比为100%；48 h测序突变样本与参考序列拟合程度为0.91，基因编辑后indel百分比为83%；72 h测序突变样本与参考序列拟合程度为0.92，基因编辑后indel百分比为48%。对比于野生型，36 h，48 h和72 h突变型斑马鱼卵黄发育存在差异，卵黄黑色素沉积量明显低于野生型，背脊部位也存在黑色素差异。推测该基因在黑色素形成方面可能具有一定作用。 综上，本试验首次克隆的兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因的11个多态位点存在2个错义突变，9个同义突变，多态性可能与兰坪乌骨绵羊黑色素的转运存在关联；斑马鱼SLC17A8基因敲除显示，该基因可能在黑色素形成过程中发挥一定作用，具体影响机制有待进一步验证。 |
| 并列题名： | Effects of SLC17A8 Gene on Melanin Formation in Lanping Black-boned Sheep (Ovis aries) eng |
| 题名主题： | 兰坪乌骨绵羊 斑马鱼 黑色素 SLC17A8基因 CRISPR/Cas9 学位论文 |
| 中图分类： | S826.89-533 |
| 个人名称等同： | 岳丹 著 |
| 个人名称次要： | 邓卫东 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20230428 |