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： 蚯蚓提取物对脂多糖诱导RAW 264.7细胞的炎症反应研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 蚯蚓提取物对脂多糖诱导RAW 264.7细胞的炎症反应研究/.张航瑜著/.徐昆龙指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 63页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210408 |
| 提要文摘： | 本研究以蚯蚓提取物（Earthworm Extracts，EE）为受试物，以脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导RAW 264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞）构建炎症模型，探讨蚯蚓提取物对RAW 264.7细胞炎症的抑制作用及对NF-κB信号通路的调节作用。采用线粒体细胞色素C氧化酶亚基I基因（cytochrome c oxidase I，COI）序列对蚯蚓进行种类鉴定和UHPLC-QE-MS对蚯蚓提取物化学成分鉴定；在细胞水平实验中，CCK-8法筛选蚯蚓提取物对于RAW 264.7细胞最大无毒浓度（TC0）；检测蚯蚓提取物干预后LPS诱导的RAW 264.7细胞中促炎细胞因子、抑炎细胞因子转录以及炎性介质的生成；基于上述研究基础对蚯蚓提取物作用于炎症进行网络药理学网络图谱构建，分析蚯蚓提取物对炎症作用的潜在途径；通过加入核转录因子抑制蛋白α（Nuclear factor of kappa B-cells inhibitor alpha，IκBα）活性抑制剂，蚯蚓提取物对炎症反应中核因子-kappa B（Nuclear Factor kappa-B，NF-κB）信号通路中关键蛋白磷酸化水平，检测NF-κB信号通路关键蛋白表达情况以及炎性细胞因子转录差异。主要研究结论如下：
通过UHPLC-QE-MS检测蚯蚓提取物含有159个化合物，其中萜类33个，生物碱类22个，氨基酸及其衍生物15个，黄酮类10个，酚类9个，脂肪酸类7个，苯丙素类7个，脂肪酰类5个，有机酸衍生物4个，醌类3个，芳香族化合物2个，异戊烯醇酯2个，胺类、酰胺类、脂质类、多胺类和山酮类各1个，其他类化合物35个。 2、蚯蚓提取物对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的影响 通过CCK-8法筛选蚯蚓提取物对RAW 264.7最大无毒浓度TC0为4 μg/mL（P>0.05），使用小于该剂量蚯蚓提取物，进一步研究了蚯蚓提取物对LPS诱导的细胞炎症中细胞因子、炎性介质的影响。结果显示，蚯蚓提取物可显著抑制促炎细胞因子：肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）的转录水平以及炎性介质诱生型一氧化氮合酶（Inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS）、一氧化氮（Nitrogen Oxide，NO）、环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2)、前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的生成（P<0.05），同时增加抑炎细胞因子白介素-10（Interleukin-10，IL-10）的转录(P<0.05)。结果表明蚯蚓提取物可通过抑制促炎细胞因子的转录、炎性介质的分泌，增加抑炎细胞因子的转录，发挥抗炎作用。 3、网络药理学分析蚯蚓提取物在炎症反应中的作用 蚯蚓提取物与炎症共同作用靶点有815个，占蚯蚓提取物总治疗靶点的87.3 %；将共同靶点进行PPI网络构建，GO、KEGG富集分析并通过网络药理学“成分-靶点-通路”图谱构建，发现蚯蚓提取物治疗炎症的活性成分主要包括芸香苦素、荜茇酰胺、多孔菌甾酮D、肠内酯、乙酰蕨素C、花生四烯酸、黄芩素等；核心靶点聚集在蛋白质磷酸化、细胞因子活性及转录、细胞周期调控，NF-κB信号途径相关靶点等；中心通路聚集于NF-κB信号通路、T细胞受体通路、Toll样受体信号通路及涉及癌症相关的通路。结果表明蚯蚓提取物可能对NF-κB具有良好的调节作用。 4、蚯蚓提取物对NF-κB所介导炎症的影响 通过Western Blot检测蚯蚓提取物及IκBα抑制剂对LPS激活的NF-κB信号通路调控作用。研究了蚯蚓提取物及IκBα抑制剂对NF-κB信号通路中关键限速蛋白IκBα及参与入核调控蛋白p65的磷酸化抑制作用，发现蚯蚓提取物效果与IκBα抑制剂类似，蚯蚓提取物呈现剂量依赖性的降低IκBα、p65的磷酸化水平(P<0.05)。说明蚯蚓提取物可以抑制NF-κB信号通路的活化，干扰核因子入核调控。并发现与抑制剂组相比，4 μg/mL蚯蚓提取物与IκBα抑制剂共同干预炎症细胞，促炎细胞因子转录水平差异显著（P<0.05），说明NF-κB信号通路是蚯蚓提取物减轻细胞炎症的通路之一。 综上所述，蚯蚓提取物在LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症中具有良好的抗炎效果，主要是通过促进抑炎细胞因子的生成以及抑制促炎细胞因子的产生、炎性介质的表达；同时也具有通过抑制NF-κB信号通路来达到抑炎作用。 |
| 并列题名： | Effect of earthworm extracts on the inflammatory response of LPS-induced RAW 264.7 cells |
| 题名主题： | 蚯蚓提取物 炎症 网络药理学 NF-κB 学位论文 |
| 中图分类： | S859.7-533 |
| 个人名称等同： | 张航瑜 著 |
| 个人名称次要： | 徐昆龙 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |