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： 红嘴鸥Mx突变株对IFN-β表达的影响及其体外抗NDV活性研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 红嘴鸥Mx突变株对IFN-β表达的影响及其体外抗NDV活性研究/.胡志辉著/.常华指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.30 |
| 载体形态项： | 71页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240433 |
| 提要文摘： | 干扰素是机体固有免疫的重要组成部分，具有广谱的抗病毒活性，干扰素β作为重要的中间诱导分子、效应分子，在机体的天然免疫中具有重要作用，其具有干扰素α及其亚型都无法替代的抗病毒作用。Mx蛋白是由干扰素诱导表达的具有抗病毒活性的蛋白，其能与病毒发生中和作用，抑制病毒的活性。目前，对于野生鸟类干扰素β、Mx基因研究相对较少，对于红嘴鸥干扰素β、Mx基因研究还未有报道。本课题拟扩增野生鸟类红嘴鸥的干扰素β基因，体外研究不同Mx突变株对IFN-β表达的影响及其体外抗NDV活性研究，为红嘴鸥干扰素β以及Mx蛋白的抗病毒活性研究奠定基础。 1. 红嘴鸥IFN-β CDS序列及生物信息学分析 根据红嘴鸥IFN-β序列设计引物，扩增大小为882 bp，用PCR扩增后构建重组T克隆质粒，并进行测序鉴定。经生物信息学分析表明IFN-β CDS序列共编码293个氨基酸，分子式为C1395H2196N468O375S6，分子质量31.716 kD，理论等电点12.06，为碱性蛋白。预测INF-β蛋白含有干扰素超家族保守结构域，无跨膜结构，存在信号肽切割位点，亲水区占据该蛋白质多肽链的区域较多，亚细胞定位主要位于细胞核，共有22个磷酸化位点，10个丝氨酸磷酸化位点，12个苏氨酸磷酸化位点，二级结构中无规则卷曲占比88.05％，B细胞表位预测存在10个肽序列，且抗原指数大于0.89。 2.红嘴鸥Mx不同突变株原核表达及重组蛋白的纯化 将实验室已构建3株红嘴鸥Mx突变株基因的T克隆质粒（pMD18-T-MxG、pMD18-T-MxC、pMD18-T-MxN），经双酶切后与原核表达载体pET32a(+) 连接，获得pET32a-MxG、pET32a-MxC、pET32a-MxN重组质粒。将不同重组菌进行表达菌、温度、诱导时间、IPTG浓度的优化，结果显示三种突变株均在Rosetta表达菌中用1.0 mM的IPTG在37℃下诱导5 h表达最好，获得大小约为61 kD、60 kD、54 kD的重组蛋白。经尿素洗涤获得较纯的重组蛋白，经复性后MxG浓度为95.12 μg/mL，MxN浓度为90.24 μg/mL，MxC浓度为115.34 μg/mL。 3. Mx不同突变株重组蛋白与NDV孵育后诱导IFN-β相对表达量的变化 将空白对照组(MOCK)、MxN蛋白＋NDV组、MxG蛋白＋NDV组、MxC蛋白＋NDV组、NDV组诱导淋巴细胞，提取不同时间点（0 h、12 h 、24 h、36 h、48 h）RNA后并反转录为cDNA，经荧光定量PCR检测IFN-β基因的相对表达量。结果显示：空白对照组36 h相对表达量最高为2.2966，NDV组 36 h相对表达量为80.2966 ，MxG蛋白＋NDV组36 h相对表达量最高为4.0，与NDV组表达差异极显著（P < 0.01)。MxC蛋白＋NDV组36 h相对表达量最高为32.4367，与NDV组表达差异极显著（P < 0.01)。MxN蛋白＋NDV组36 h相对表达量最高为12.7233，与NDV组表达差异极显著（P < 0.01)，表明3株Mx突变株具有抗病毒作用；MxN蛋白＋NDV组、MxG蛋白＋NDV组、MxC蛋白＋NDV组（同一时间点）IFN-β基因相对表达量差异分析，表明抗病毒活性MxG蛋白＞MxN蛋白＞MxC蛋白。 本研究表明Mx突变株蛋白均具有抗病毒效果，为红嘴鸥干扰素β以及Mx蛋白的抗病毒活性研究奠定基础。 |
| 并列题名： | Study on the effect of the Mx mutant strain of Larus ridibundus on IFN-β expression and its anti-NDV activity in vitro eng |
| 题名主题： | Mx基因 IFN-β基因 原核表达 学位论文 |
| 中图分类： | S811.5-533 |
| 个人名称等同： | 胡志辉 著 |
| 个人名称次要： | 常华 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240529 |