书目详细信息
： 叶斑艺兰花RCA（Rubisco activase）基因的遗传转化及功能的初步研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 叶斑艺兰花RCA（Rubisco activase）基因的遗传转化及功能的初步研究/.陈璐著/.李枝林指导 |
| 出版发行项： | 2021.05.24 |
| 载体形态项： | 53页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 园林园艺学院, 学号2018210156 |
| 提要文摘： | 兰花作为我国栽培历史悠久的传统花卉，以其优美的花型、独特的株型、淡雅的花香而受到人们的广泛喜爱。其中，兰花叶斑艺品种观赏价值很高。然而，目前市场上的叶艺兰多源于野生兰花经过天然杂交获得的后代，或在长期生长发育过程中产生的自然变异植株，选育时间较长、数量极为稀少、艺象不稳定，定向叶艺兰的培育极为困难。因此，本实验以项目组前期获得的RCA基因的全长序列为基础，构建植物过表达和敲除载体，运用农杆菌介导法进行铁皮石斛的遗传转化，检测阳性植株，旨在探索RCA基因与叶斑艺形成的关系，为叶艺兰育种提供基因资源。主要研究结果如下： 1.对RCA基因进行了同源性分析，结果发现，RCA基因与铁皮石斛的同源性最高，为85%，进化树分析比对的结果发现与铁皮石斛的RCA基因亲缘关系最近，且聚在了同一枝上，这也与同源性比较的结果相一致。对RCA基因亚细胞定位的结果表明，该基因主要定位在叶绿体上。 2.将RCA基因连接到植物表达载体pCAMBIA1300-35S中，此载体含有HygR筛选标记，大小为1026bp，经过鉴定，成功获得过表达载体；运用Golden Gate策略，用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除载体，载体中带有HygR筛选标记，大小为760bp，针对目的基因设计出了两个靶位点，构建出gRNA后与Cas9载体进行连接，检测后表明成功构建敲除载体，为后续的遗传转化奠定基础。 3. 遗传转化的优化条件结果显示：当OD600值为0.9，侵染30 min，TMT浓度为50 mg/L，Hyg浓度为55 mg/L时对铁皮石斛原球茎的遗传转化效率最高。过表达阳性铁皮石斛原球茎的存活率为12.5%；敲除的遗传转化铁皮石斛原球茎的存活率为5.8%。将存活的原球茎分别转接到分化培养基上，配方为1/2MS+30 g/L蔗糖+7.2 g/L琼脂+0.4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+80g/L土豆+1g/L碳粉+1g/L花宝一号，过表达存活原球茎的分化率为78.5%；而敲除的遗传转化存活的原球茎未分化。 4.经检测，获得过表达阳性植株5株，敲除阳性原球茎3颗。对过表达阳性植株进行形态和生理指标检测发现，过表达植株的叶宽、叶片数、株高、根数、茎粗、鲜重均分别显著高于CK的91.2%、78.3%、26.9%、100.01%、81.3%和92.9%；可溶性糖、可溶性蛋白质含量、叶绿素a含量、叶绿素b含量、类胡萝卜素含量均分别显著高于CK的113.73%、143.62%、62.05%、133.9%和88.42%。透射电镜的观察结果显示：过表达转化后的铁皮石斛原球茎中叶绿体明显多且优于对照，而在石斛中同源敲除RCA基因的原球茎无法分化和发育成正常植株，原球茎中没有叶绿体的存在。说明RCA基因对植株生长、光合色素合成以及叶绿体的发育等均有重要影响。 综上所述，叶斑艺兰花的RCA基因与铁皮石斛的同源性最高（85%），亚细胞定位在叶绿体上；OD600值为0.9，侵染30 min，TMT 浓度为50 mg/L，Hyg 浓度为55 mg/L铁皮石斛的遗传转化效率最高；RCA基因促进了植株叶绿体的发育、光合色素合成等，进而有助于植株生长。 |
| 并列题名： | A preliminary study on the function of the RCA (Rubisco activase) gene in the Cymbidium with Leaf Color eng |
| 题名主题： | 叶斑艺兰花 RCA基因 遗传转化 功能研究 学位论文 |
| 中图分类： | S682.31-533 |
| 个人名称等同： | 陈璐 著 |
| 个人名称次要： | 李枝林 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20220609 |