书目详细信息
： 长链非编码RNA-LOC103222771调控PRRSV感染增殖的分子作用机制
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 长链非编码RNA-LOC103222771调控PRRSV感染增殖的分子作用机制/.杨超著/.尹革芬指导 |
| 出版发行项： | 2022.5.24 |
| 载体形态项： | 60页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院,学号2019210352 |
| 提要文摘： | 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是全球最具破坏性的猪疾病之一，给我国生猪养殖业造成巨大的经济损失。长链非编码 RNA （LncRNA）是一类长度超过 200 nt的RNA，没有开放阅读框，但具有多种生物学功能，在病毒感染及复制中具有重要意义。本研究在前期转录组测序结果中筛选到三个LncRNA（LOC103222771、LOC103222765和LOC103222771），验证后进一步通过敲低LncRNA-LOC103222771后进行转录组测序分析，获得差异表达显著的Claudin-4，利用相关的实验手段验证宿主蛋白Claudin-4对PRRSV感染增殖的影响，探讨LncRNA-LOC103222771通过Claudin-4调控PRRSV的感染增殖，研究结果如下： （1）在Marc-145和PAM细胞分别接种PRRSV，于不同感染时间点通过RT-qPCR方法检测LncRNA-LOC103222771、LncRNA-LOC103222765和LncRNA-LOC103222769的表达量。结果显示：Marc-145细胞接毒组和PAM细胞接毒组的LncRNA-LOC103222771 mRNA表达量均显著上调（P<0.01），分别是对照组的1.7～2.1倍和1.4～1.6倍。 （2）通过siRNA技术有效敲低Marc-145细胞中的LncRNA-LOC103222771后，于接种PRRSV后的不同时间点，通过RT-qPCR、Western blot、间接免疫荧光染色（IFA）、病毒滴度测定的方法检测PRRSV的感染增殖变化。结果显示：敲低LncRNA-LOC103222771后（干扰效率为56%～83%），PRRSV ORF7的mRNA表达水平较接毒对照组表达显著降低（P<0.01）；PRRSV N蛋白的表达相对于接毒对照组也明显下降；PRRSV 病毒滴度较接毒对照组下降了39～69倍。 （3）敲低Marc-145细胞中LncRNA-LOC103222771后的不同时间点，收取细胞总RNA，通过转录组测序方法结合生物信息学分析选取可能受LncRNA-LOC103222771调控的六个差异表达显著的基因（Claudin-4、IL-11、LAMP1、STK38、CTSA和Rab15），并通过RT-qPCR方法筛选出与对照组相比基因表达差异显著的Claudin-4（P<0.01）进行后续实验。结果显示：与对照组相比较，在敲低LOC103222771后的不同时间点，Claudin-4的mRNA及蛋白表达水平均显著上调1.4～1.6倍（P<0.01）；敲低LncRNA-LOC103222771后接种PRRSV，与接毒对照组相比，Claudin-4基因的mRNA及蛋白表达水平在不同时间点均显著上调（P<0.01）；与未接毒对照组相比，Claudin-4基因的mRNA及蛋白表达水平在不同时间点均下调。 （4）在Marc-145细胞中分别转染Claudin-4 特异性干扰siRNA序列和Claudin-4真核表达质粒，转染后24 h接种PRRSV，于接毒后不同时间点通过RT-qPCR和Western blot检测宿主基因Claudin-4、LncRNA-LOC103222771、PRRSV ORF7的mRNA和蛋白表达变化。结果显示：敲低/过表达Claudin-4后接种PRRSV组与接毒对照组相比，LncRNA- LOC103222771的mRNA表达水平显著上调/下调（P<0.01）；PRRSV ORF7的mRNA表达水平显著上调/下调，PRRSV N蛋白的表达量增加/减少。 综上所述，本研究通过体外细胞实验证实了宿主LncRNA-LOC103222771与 Claudin-4蛋白在PRRSV感染Marc-145细胞过程中扮演着重要角色，LncRNA-LOC103222771通过负反馈调节Claudin-4的表达，从而影响PRRSV在Marc-145细胞中的增殖感染。研究结果可对PRRSV感染的致病机制和新的抗病毒治疗方法的开发提供新思路。 |
| 并列题名： | Molecular mechanism of long chain noncoding RNA- LOC103222771 in regulating the infection and proliferation replication of PRRSV eng |
| 题名主题： | PRRSV Marc-145细胞 PAM细胞 LncRNA-LOC103222771 Claudin-4 学位论文 |
| 中图分类： | S855.3-533 |
| 个人名称等同： | 杨超 著 |
| 个人名称次要： | 尹革芬 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20230427 |