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： 烟草扭脉病毒rtp基因序列分析及烟草扭脉病毒在烟蚜体内的侵染路径
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 烟草扭脉病毒rtp基因序列分析及烟草扭脉病毒在烟蚜体内的侵染路径/.杨亚辉著/.李凡，陈小姣指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.25 |
| 载体形态项： | 69页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 植物保护学院, 学号2020210312 |
| 提要文摘： | 烟草丛顶病是一种由多种病原物复合侵染引起的特殊烟草病害，曾给云南烟草生产造成毁灭性的灾害，目前已有向更多地区和作物扩散的风险。番茄丛矮病毒科（Tombusviridae）幽影病毒属（Umbravirus）的烟草丛顶病毒（Tobacco bushy top virus，TBTV），Solemoviridae科马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）的烟草扭脉病毒（Tobacco vein distorting virus，TVDV）为其主要病原物。介体蚜虫的传播是烟草丛顶病暴发的主要途径，烟草丛顶病主要依靠蚜虫以持久非增殖方式传播，其中TVDV是烟草丛顶病被蚜虫传播的关键病毒。TVDV基因组的ORF3编码外壳蛋白（coat protein，CP），ORF3通读后与ORF5形成ORF3-ORF5编码框，翻译出通读蛋白（readthrough protein，RTP），ORF5称为通读域（readthrough domain，RTD），CP和RTP是TVDV的结构蛋白，与TVDV对植物的侵染和蚜虫传播密切相关，探究TVDV rtp基因（含cp基因和rtd区域）的序列差异对于分析TVDV CP和RTP的功能有重要意义。同时，本研究通过分析TVDV在烟蚜体内的侵染路径，及鉴定与TVDV关键虫传蛋白CP蛋白互作的介体蚜虫蛋白，为进一步设计针对介体蚜虫靶标蛋白的烟草丛顶病防控策略提供理论基础。主要研究结果如下： 以2020年~2022年从云南楚雄、大理、保山及红河采集的染病烟草样品为材料，对TVDV的rtp基因进行克隆和测序，得到TVDV 7个不同分离物的rtp基因序列，长度均为2172 nt，其中含618 nt的cp基因，1554 nt的rtd区；推导的TVDV的RTP蛋白共编码722个氨基酸，其中包含CP蛋白的205个氨基酸，RTD的517个氨基酸。多重序列比对结果发现，本研究获得的7个TVDV分离物与GenBank上登录的8个TVDV分离物间cp基因核苷酸序列一致性在98.71%~100%，不同TVDV分离物间CP蛋白的氨基酸序列一致性在98.05%~100%，存在4个氨基酸的差异；本研究获得的7个TVDV分离物与GenBank数据库登录的4个TVDV分离物间rtd区核苷酸序列一致性在96.68%~99.81%，RTD氨基酸序列一致性在96.52%~100%，存在39个氨基酸的差异。 利用RT-PCR检测、免疫荧光定位以及qRT-PCR定量分析探究烟蚜饲毒后不同时间点TVDV在介体烟蚜内的侵染路径，发现取食TVDV侵染的本氏烟植株约30 min后，烟蚜的肠道就能检测到TVDV，且只能到达烟蚜的中肠。随着烟蚜获毒后时间的延长，病毒开始在烟蚜中肠积累，获毒后1 h至10 h的烟蚜肠道TVDV保持在较高水平；烟蚜获毒后12 h肠道内的TVDV含量开始下降，获毒后23 h时中肠中已检测不到TVDV，即TVDV在烟蚜中肠内停留时间约23 h；饲毒后24 h时，烟蚜的唾液腺中可以检测到TVDV，随着时间推移，在唾液腺中的TVDV积累量逐渐上升，到获毒后25 h时，唾液腺中的TVDV含量达到最高，随后开始下降，到27 h时唾液腺中已检测不到TVDV，TVDV在烟蚜唾液腺停留时间约为3h。 利用免疫荧光技术标记TVDV的CP蛋白与烟蚜的肌动蛋白（actin），发现TVDV CP与烟蚜actin蛋白在烟蚜中肠细胞内存在共定位现象，表明TVDV CP与烟蚜actin蛋白在烟蚜体内可能存在互作关系。利用酵母双杂交技术分析TVDV CP与烟蚜的actin蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）和激活的蛋白激酶C受体1（receptor for activated C kinase 1，Rack1）的互作表明，TVDV CP与烟蚜的actin和GAPDH蛋白均能发生互作，但与烟蚜的Rack1蛋白不能发生互作；并进一步明确TVDV CP与烟蚜actin蛋白互作的关键结构域为烟蚜actin5C蛋白的aa253~aa376。 综上，不同TVDV分离物的rtp基因序列间均存在一定程度的差异，TVDV cp基因和CP蛋白在序列上相对保守，rtd区核苷酸序列和RTD氨基酸序列变异较大；烟蚜获得TVDV最短时间约为30 min，TVDV在烟蚜中肠内停留时间约为23 h，烟蚜获毒后24 h时，TVDV到达烟蚜唾液腺，在唾液腺中停留时间约为3 h。TVDV CP能与介体烟蚜编码的actin蛋白和GAPDH蛋白发生互作。相关的研究结果对于揭示TVDV侵入介体烟蚜内的机制及阻断TVDV的蚜虫传播具有重要的意义。 |
| 并列题名： | Sequence Analysis of the rtp Gene of Tobacco Vein Distorting Virus and Infection Route of TVDV in Myzus Persicae |
| 题名主题： | 烟草扭脉病毒 rtp基因 烟蚜 侵染路径 肌动蛋白 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 学位论文 |
| 中图分类： | S435.72-533 |
| 个人名称等同： | 杨亚辉 著 |
| 个人名称次要： | 李凡 指导 |
| 个人名称次要： | 陈小姣 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |