书目详细信息
： 猪非典型瘟病毒云南株变异基因Mut干扰宿主细胞NF-κB转录活性的研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 猪非典型瘟病毒云南株变异基因Mut干扰宿主细胞NF-κB转录活性的研究/.何维琪著/.孙永科指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 68页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210410 |
| 提要文摘： | 猪非典型瘟病毒（Atypical Porcine Pestivirus，APPV）自2015年首次在美国报道以来，迄今已经在全世界多个国家流行，给全球养猪业的健康发展造成了严重的威胁。APPV是近年来新发现的瘟病毒，其致病和免疫抑制机理目前尚不清楚，因此，目前该病仍缺乏有效的防控措施。课题组分离得到了APPV云南株（APPV-YN），发现了APPV云南株（APPV-YN）临床症状非典型化的关键基因Mut，且Mut显著影响宿主细胞受NF-κB转录因子调控的炎症基因表达，推测Mut编码的蛋白可能是新的免疫调控蛋白，通过抑制NF-κB活性来调控宿主免疫和病理损伤，但其具体调控分子机制目前尚不清楚。 为了深入探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活性的影响。本研究将APPV-YN Mut构建真核表达质粒、慢病毒重组质粒和稳定表达Mut蛋白的细胞系；通过生信分析软件分析了APPV-YN Mut的生物学特征；用TNF-α模拟感染，检测NF-κB P65蛋白的核定位以及Mut对NF-κB转录活性的影响，获得了以下结果： （1）APPV-YN Mut的真核表达及生物学特征。将APPV-YN Mut构建的真核表达质粒pCMV-Mut和pEGFP-N1-Mut及慢病毒重组质粒pCDH-CMV-Mut在SVEC细胞中稳定表达，表达蛋白大小为13kDa；理化性质预测Mut为稳定的亲水蛋白，分子量大小约13kDa；二级和三级结构分析显示Mut蛋白无跨膜螺旋结构，无信号肽；亚细胞定位分析结果显示，该蛋白主要定位于细胞质，荧光亚细胞定位与预测结果一致；蛋白磷酸化位点及作用激酶预测结果显示，该蛋白有8个苏氨酸磷酸化位点，8个丝氨酸磷酸化位点，1个酪氨酸磷酸化位点，可作用于蛋白激酶C（PKC）、丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）、蛋白激酶A（PKA）、表皮生长因子受体（EGFR）、细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）等相关激酶及蛋白受体。 （2）APPV-YN Mut 对NF-κB转录活性的影响。CCK8、双荧光素酶报告基因及EMSA试验结果表明，Mut蛋白过表达影响TNF-α作用下的细胞增殖，抑制TNF-α介导的NF-κB转录活性（****P＜0.0001），降低了转录因子NF-κB与靶序列的结合能力，且这种抑制作用与Mut蛋白的表达量相关；间接免疫荧光结果显示，Mut蛋白在细胞核和细胞质都与NF-κB P65存在共定位，减少了P65的入核量（****P＜0.0001），延长刺激后的入核激活时间； Western Blot及q-RT-PCR结果发现，表达Mut蛋白的细胞在刺激后与对照细胞相比极显著抑制了IκB-α的磷酸化和降解（****P＜0.0001），P-P65蛋白量极显著低于对照细胞（****P＜0.0001），极显著下调RelA、NFKBIA、CHUK、IKBKB基因的转录水平（****P＜0.0001）。 综上所述，本研究结果表明，APPV-YN Mut通过抑制与典型NF-κB激活途径相关的蛋白信号来影响NF-κB通路的激活；APPV-YN Mut蛋白靶向IκBα的磷酸化和降解，以阻止P65的释放入核及磷酸化修饰，抑制下游NF-κB依赖基因的激活，显著降低炎症基因表达。这为阐明 APPV-YN Mut 在猪非典型瘟病毒的致病机制和临床症状非典型化的分子机制研究提供了研究基础，为APPV非典型化及免疫逃避机制提供了新的思路。 |
| 并列题名： | Study on the interference of APPV-YN Mut on the transcriptional activity of NF-κB in host cells |
| 题名主题： | 猪非典型瘟病毒 APPV-YN Mut NF-κB信号通路 免疫逃避 学位论文 |
| 中图分类： | S855.3-533 |
| 个人名称等同： | 何维琪 著 |
| 个人名称次要： | 孙永科 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |