书目详细信息
： 甘蔗蔗糖转运蛋白ShSUT4互作因子的筛选与鉴定
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 甘蔗蔗糖转运蛋白ShSUT4互作因子的筛选与鉴定/.赵雪婷著/.李富生，张树珍指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.31 |
| 载体形态项： | 68页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 农学与生物技术学院, 学号2020210153 |
| 提要文摘： | 蔗糖是甘蔗光合作用的主要产物，也是甘蔗体内光合产物运输、分配及其储存的主要形式。蔗糖在进入贮藏薄壁组织液泡中积累时，需要蔗糖转运蛋白控制液泡内蔗糖浓度，而位于液泡膜上SUT4类型蔗糖转运蛋白对蔗糖积累将起重要调节作用，直接决定甘蔗的经济价值。目前为止，甘蔗中糖转运蛋白如何调控蔗糖的积累机制尚不清楚。本文在克隆甘蔗蔗糖转运蛋白基因ShSUT4基础上，利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术(Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC)研究ShSUT4的互作因子，结果如下： (1)利用Split Ubiquitin System(SUS)筛选甘蔗ShSUT4的互作蛋白。筛选出80个阳性克隆，测序分析后得到18个互作蛋白，包括3个光合作用相关蛋白、3个转运类蛋白、4个转录因子等蛋白。选择光系统Ⅱ亚基R(PsbR)、RF2a转录因子、铜转运蛋白COPT5.1-like(copper transporter 5.1-like)、磷酸盐转运蛋白PHT(phosphate translocator)等蛋白进行一对一验证，结果发现，ShSUT4与PsbR、RF2a、COPT5.1-like、PHT存在互作，ShSUT4自身不形成二聚体，且发现较高浓度蔗糖比较低浓度蔗糖更有利互作。进一步通过BiFC证实ShSUT4与ShPsbR、ShRF2a、ShCOPT5.1-like、ShPHT在烟草表皮细胞的质膜上互作。 (2)构建基因编辑载体ShPsbR-Cas9，转化农杆菌菌株EHA105后遗传转化甘蔗愈伤组织，经过恢复、筛选、分化、生根等步骤，通过Bar基因检测以及基因编辑载体sgRNA表达盒检测，得到了45株阳性植株。 (3)在甘蔗不同部位的表达分析发现ShPsbR在新台糖22号的-1叶表达量最高、+1叶次之，在茎秆和根中的表达量低，表明ShPsbR主要存在于甘蔗能进行光合作用的绿色组织中；在干旱和盐胁迫条件下ShPsbR基因均上调表达，且在胁迫处理12h时显著上调表达。表明ShPsbR可能通过调节叶片光合作用，从而影响糖分的合成与转运来调节细胞的渗透势，进而响应干旱和盐胁迫。 (4)ShPsbR在ShSUT4-RNAi植株(抑制ShSUT4表达能够使甘蔗糖分降低)中+1叶和-1叶中的表达较CK均明显降低，在ShSUT4过表达植株(过表达ShSUT4能够使甘蔗糖分升高)的+1叶和-1叶中的表达变化不明显，推测ShPsbR表达变化能够改变叶片光合作用合成蔗糖的速率，进而影响ShSUT4对蔗糖的转运效率，以维持细胞内的糖稳态。 |
| 并列题名： | Screening and Identification of Interaction Partner of Sucrose Transporter ShSUT4 in Sugarcane |
| 题名主题： | 蔗糖转运蛋白 蛋白互作 鉴定 甘蔗 学位论文 |
| 中图分类： | S566.1-533 |
| 个人名称等同： | 赵雪婷 著 |
| 个人名称次要： | 李富生 指导 |
| 个人名称次要： | 张树珍 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |