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： 蚯蚓提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的影响研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 蚯蚓提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的影响研究/.武玲著/.徐昆龙指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 93页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2018210340 |
| 提要文摘： | 本研究以蚯蚓提取物（Earthworm Extracts，EE）为受试药物，利用葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium，DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）模型，探究蚯蚓提取物对UC小鼠的作用，并通过网络药理学和蛋白组学分析蚯蚓提取物在溃疡性结肠炎中的作用机理，为进一步揭示蚯蚓在中医中药中作为溃疡性结肠炎治疗药物提供理论依据。实验选取6周龄雄性C57BL/6小鼠72只，并随机分为空白对照组和模型组，共6组，采用3.5 %DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型，并对模型组给予不同浓度蚯蚓提取物灌胃处理。观察小鼠UC过程中临床症状，10 d后，测定脾脏大小、结肠长度；对结肠组织进行HE染色（Hematoxylin-eosin staining，HE）和病理组织学评分（Histological score，HS）；免疫组化检测结肠组织中炎性细胞浸润；测定结肠组织中促炎细胞因子、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和抑炎细胞因子白细胞介素10（IL-10）的表达量；测定结肠组织中粘蛋白2（Mucin，Muc 2）、带状闭合蛋白-1（Zonula occludens protein，ZO-1）和咬合蛋白（Occludin）表达量。通过超高液相色谱-质谱联用（UHPLC-QE-MS）非靶标代谢组学检测蚯蚓提取物的化合物成分，基于网络药理学分析蚯蚓提取物活性成分对溃疡性结肠炎的影响；通过Lable free非标记定量蛋白质组学方法，鉴定蚯蚓提取物中主要蛋白成分并分析蚯蚓提取物在溃疡性结肠炎中潜在的作用机制。主要研究结论如下： 1、蚯蚓提取物对溃疡性结肠炎小鼠生理指标的影响 对72只小鼠进行随机分组，根据实验需要分为6组，即空白对照组（Control）、DSS模型组（DSS）、DSS模型+蚯蚓提取物高剂量组（DSS+EE-H 20 mg/kg）、DSS模型+蚯蚓提取物中剂量组（DSS+EE-M 10 mg/kg）、DSS模型+蚯蚓提取物低剂量组（DSS+EE-L 5 mg/kg）和DSS模型+阳性药物组（DSS+5-ASA 50 mg/kg）。每组12只小鼠，每笼饲养3只，每天1次、固定时间并按上述剂量分组做灌胃处理。每2 d更换新鲜配制的3.5 %DSS溶液。采用3.5 %DSS诱导小鼠UC模型，与对照组相比，DSS模型组小鼠体重下降、粪便形态不完整，出现血便、疾病活动指数评分（Disease activity index，DAI）上升（P<0.01），脾脏肿大、结肠明显缩短（P<0.01），肠道呈暗红色、肿胀、内容物减少；经蚯蚓提取物处理后，UC小鼠体重下降减缓、粪便逐渐成形，血便和稀便减少，DAI评分下降（P<0.01），脾脏肿大、结肠长度缩短和肠道肿胀情况得以显著改善（P<0.05）。结果表明蚯蚓提取物对UC小鼠临床症状具有较好的缓解效果。 2、蚯蚓提取物对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织损伤的影响 对UC小鼠结肠组织进行HE染色和免疫组化测定组织内中性粒细胞标志物CD177+及巨噬细胞标志物F4/80+表达，观察肠道组织病变程度，分析炎性细胞浸润情况。与对照组相比，DSS模型组黏膜层可见较大面积溃疡，肠上皮细胞及隐窝结构被破坏，杯状细胞基本消失，并伴有较多炎性细胞浸润，HS评分显著升高（P<0.01）；经蚯蚓提取物处理，病变程度有较大缓解，炎性病变范围变少，隐窝结构和组织上皮细胞恢复完整，炎性细胞浸润的程度减少（P<0.05），且缓解效果呈浓度依赖性趋势，结果表明蚯蚓提取物对UC小鼠结肠组织损伤具有一定的修复作用。 3、蚯蚓提取物对溃疡性结肠炎小鼠组织中炎症细胞因子转录影响 测定UC小鼠结肠组织中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抑炎因子IL-10的表达情况。蚯蚓提取物可显著抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达（P<0.01）；显著促进抑炎因子IL-10的表达（P<0.05）。结果表明蚯蚓提取物可通过调节炎性细胞因子产生抗炎作用，缓解小鼠UC。 4、蚯蚓提取物对溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障功能的影响 测定UC小鼠结肠组织中粘蛋白（Muc2），紧密连接蛋白（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）表达情况。蚯蚓提取物处理后，可以显著增加小鼠结肠组织中Muc2和ZO-1、occludin的表达水平（P<0.05），结果表明蚯蚓提取物可以通过修复UC小鼠肠道损伤，改善肠黏膜屏障功能。 5、网络药理学分析蚯蚓提取物在溃疡性结肠炎中的潜在作用 通过UHPLC-QE-MS鉴定到蚯蚓提取物中159个化合物，包括萜类、氨基酸类、黄酮类、脂肪酸类等。蚯蚓提取物与溃疡性结肠炎共同作用靶点有550个，占蚯蚓提取物治疗靶点的58.94 %；将共同靶点信息进行GO、KEGG富集分析，PPI网络、网络药理学“成分-靶点-通路”图谱构建，发现蚯蚓提取物治疗溃疡性结肠炎的活性成分主要有：黄芩素、贝萼皂苷元、花生四烯酸、汉黄芩素、肠内素、山药素IV、13-羟-十八碳二烯酸、原地衣硬酸、多孔菌甾酮D；核心靶点聚集在机体炎症反应、免疫应答调控及细胞生长、多个方面；通路涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路和癌症信号通路等。结果表明蚯蚓提取物对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎症具有抗炎作用和修复作用。 6、蛋白组学分析蚯蚓提取物在溃疡性结肠炎中的潜在作用 通过LFQ定量蛋白质组学鉴定到蚯蚓提取物中117个蛋白。将鉴定到的蛋白进行COG蛋白聚类分析、GO、KEGG富集分析，蛋白-蛋白互作网络分析，发现蚯蚓提取物治疗溃疡性结肠炎核心蛋白主要有：溶血素、超氧化物歧化酶、蚓激酶、溶菌酶；核心蛋白主要在细胞外发挥作用，并对一些蛋白、酶等的结合及活性起调节作用，参与机体蛋白代谢、细胞过程调节、物质运输以及免疫应激等过程；通路涉及神经炎症相关信号通路，蛋白互作主要与线粒体功能有关。结果表明蚯蚓提取物能够缓解溃疡性结肠炎可能与线粒体能量产生和转化、细胞的生长、增殖和调亡有关。 综上所述，蚯蚓提取物可减少小鼠体重下降和DAI评分，减轻结肠组织损伤和炎性细胞浸润，调控炎性细胞因子转录，修复肠道完整性、改善肠黏膜屏障功能来，对缓解溃疡性结肠炎小鼠的临床症状和病理损伤具有一定效果。 |
| 并列题名： | Effects of earthworm extract on ulcerative colitis induced by dextran sodium sulfate in mice |
| 题名主题： | 蚯蚓提取物 葡聚糖硫酸钠 溃疡性结肠炎 缓解作用 学位论文 |
| 中图分类： | S859.7-533 |
| 个人名称等同： | 武玲 著 |
| 个人名称次要： | 徐昆龙 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |