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： 鸡致瘤病毒分离鉴定及疫苗接种时间优化研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 鸡致瘤病毒分离鉴定及疫苗接种时间优化研究/.李晓红著/.陈培富,杨亮宇指导 |
| 出版发行项： | 2019.5.28 |
| 载体形态项： | 64页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 昆明某地方鸡保种场近年陆续发生鸡群不分品种、以性成熟期发病为主的无 症状突然死亡，造成重要的经济损失。在前期调查研究中，首先对病死鸡做初步 病理剖检，发现该病以肝、脾肿大为共同的显著特征，提示该病为增生性疾病； 随后进行血清学调查，发现该鸡群禽白血病病毒（ALV）p27 抗原阳性率约为40%， 据此怀疑该病由ALV 感染所致。为尽快查明病因，本试验首先对发病高峰期的 病死鸡进行仔细的病理剖检及病变记录，随后采集p27 抗原阳性存活个体外周血 白细胞和病死个体肿大肝脾及白色结节等病变组织，针对ALV、网状内皮增生 症病毒（REV）和马立克病毒（MDV）等可能存在的肿瘤相关病原及免疫防控 措施开展以下研究： （1）从p27 抗原阳性的30 只外表健康鸡，提取白细胞总RNA，应用逆转 录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，按参考文献提供的引物扩增检测ALV 和 REV 核酸；分别取其白细胞和病死鸡病变组织细胞接种鸡胚或鸡胚成纤维细胞 系（DF-1 细胞），并传代培养以分离病毒，进一步对组织细胞培养物用RT-PCR 和间接免疫荧光（IFA）技术分别检测病毒核酸与抗原。 （2）从病死鸡白色结节组织，提取细胞总DNA，应用PCR 技术以自行设 计引物扩增检测MDV 核酸；取新鲜白色结节组织制成原代细胞，同时取其研磨 上清分别接种原代鸡胚成纤维细胞（CEF）和DF-1 细胞，上述细胞经传代培养， 检测MDV 核酸，并应用IFA 和荧光定量PCR（qPCR）技术对接毒的DF-1 细胞 分别检测MDV 抗原和细胞培养上清病毒粒子的拷贝数；以参考引物PCR 扩增 MDV 分离株致瘤基因，应用DNAMAN 比对测序结果。以Illumina-Hiseq 技术 测定分离株全基因组序列，并使用SnapGene3.0 绘制全基因组图谱，进一步应用 MEGA6.0 绘制基于基因组的遗传进化树。 （3）对18 日鸡胚（n=30）与1 日龄雏鸡（n=30）接种梅里亚CVI988+HVT 细胞结合二价疫苗（0.2 mL/个体），于40 日龄采集翅下静脉血，分别应用间接 酶联免疫吸附试验（indirect ELISA）和qPCR 技术测定血浆MDV 抗体效价（用 S/N 比值表示）和外周血淋巴细胞内疫苗株CVI988 核酸复制水平（用CT 值表 示），以卡方检验分析组间数据（Mean±SD）差异，评价人工免疫效果。 结果：（1）对大量病死鸡的外观检查和病理剖检发现，仅少数病死个体表 鸡致瘤病毒分离鉴定及疫苗接种时间优化研究 ii 现消瘦及呈劈叉姿势，所有病死个体均表现肝、脾不同程度的肿大，质地脆弱， 在某些病死个体，还可见肝、脾、肌肉、胸骨、皮下乃至肠道组织伴有大量的白 色斑点或结节，腹腔有多量出血及渗出液，皮肤及肌肉结节质地坚硬，难以研磨， 有的可见心脏发白，心包有积液。（2）p27 抗原阳性的30 只鸡在饲养期间未见 发病，从其白细胞样品检测到ALV-E 亚群核酸阳性有24 只，未检到ALV 其他 亚群，病变组织ALV 核酸呈阴性，以白细胞和病料接种鸡胚或DF-1 细胞传代也 均显示ALV 核酸及抗原阴性，病变组织核酸检测和细胞分离培养REV 均为阴性。 （3）PCR 扩增检测病变组织样品、肿瘤细胞原代及传代培养物和接种病料的鸡 胚成纤维细胞，均显示MDV 核酸阳性，IFA 分析显示DF-1 细胞核MDV 抗原呈 阳性，qPCR 测定DF-1 细胞培养上清病毒粒子含量约为2×103 个拷贝/μL；PCR 扩增显示分离株携带meq、pp38 和132bp 三个致瘤基因，扩增产物长度分别为 1010 bp、562 bp 和2221 bp，与参考序列的相似性分别为98.83%，98.79%和 99.74%。分离株全基因组长约175 Kb，DNA 序列比对表明该分离株为MDV 1 血清型（鸡疱疹病毒2 型），在进化树上距离中国西南野毒分离株LMS 最近， 而距离同型减毒疫苗株CVI988 较远。（4）在40 日龄，18 日鸡胚疫苗接种组抗 体效价（ 5.653±1.218 ） 极显著高于1 日龄疫苗接种组（ 4.723±1.157 ） （P=0.004<0.01），前者外周血淋巴细胞内CVI988 核酸CT 值（4.775±0.629） 极显著高于后者（2.638±0.454）（P=0.002<0.01）。 结论：（1）该鸡群未检出REV 感染，虽携带内源性ALV-E 亚群，但不是 引起该场鸡群肝脾肿大的病原；（2）本试验分离到具有致瘤能力的MDV 1 型野 毒株，是引起该鸡场肝脾肿大的根本病原；（3）18 日鸡胚接种CVI988+HVT 细胞结合疫苗较1 日龄雏鸡接种同种疫苗的免疫效果好。 |
| 并列题名： | Isolation and identification of chicken oncogenic virus andoptimization of vaccination time |
| 题名主题： | 鸡肝脾肿大 ALV REV MDV 免疫时间 学位论文 |
| 中图分类： | S831.7-533 |
| 个人名称等同： | 李晓红 著 |
| 个人名称次要： | 陈培富 指导 |
| 个人名称次要： | 杨亮宇 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |