ISBN/价格: | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
---|---|
作品语种: | chi |
出版国别: | CN 530000 |
题名责任者项: | 长蕊木兰体细胞胚胎发生途径及种质资源超低温保存/.张宁著/.赵雁指导 |
出版发行项: | 2023.5.12 |
载体形态项: | 59页:;+图表:;+30cm |
一般附注: | 园林园艺学院, 学号2020210198 |
提要文摘: | 长蕊木兰(Alcimandra cathcartii)是国家一级保护植物,属于极小种群,种群数量少,种质资源重要,其天然更新能力弱,面临灭绝的威胁。有关长蕊木兰体细胞胚胎发生体系以及种质资源超低温保存体系建立的研究尚未报道,本研究以长蕊木兰未成熟种子合子胚为材料,通过诱导得到胚性愈伤组织,首先筛选出胚性愈伤组织增殖和分化的最佳培养基,进一步对分化的体细胞胚进行萌发和转化,并对胚性愈伤组织进行超低温保存。本研究建立了一个高效的长蕊木兰体细胞胚发生体系,为长蕊木兰优良品种的规模化繁育和分子育种提供了高效的再生体系。主要研究结果如下: 1. 在长蕊木兰胚性愈伤组织增殖培养基筛选过程中,向培养基中添加不同浓度的水解酪蛋白(Casein hydrolysate CH)和蔗糖观察愈伤组织的生长状态,发现CH浓度越高,褐化现象越严重,添加30g/L蔗糖时愈伤组织生长状态较好,呈鲜黄色松散状态。研究结果表明长蕊木兰胚性愈伤组织增殖过程中不需要添加CH,蔗糖的最佳浓度为30g/L。 2. 细胞团分选和外源脱落酸(Abscisic Acid ABA)提升了体胚分化能力。用细胞筛将细胞团分选为0.1-0.2mm、0.2-0.45mm、0.45mm以上三个区间,并测试其分化能力,发现0.1-0.2mm和0.2-0.45mm细胞团分化体胚较多,平均每400团细胞可以产生31.6和32.7个体胚,0.45mm以上细胞团几乎不分化体胚。外源ABA对0.1-0.2mm和0.2-0.45mm细胞团进行处理,提升了体胚发生能力,添加4mg/L ABA后平均每400团细胞可以产生89.33和59.33个体胚。 3. 成熟子叶胚在添加GA3和Karrikin的培养基上进行萌发和转化,结果表明GA3和Karrikin对体细胞胚的萌发和转化有促进作用,培养四周时萌发率都达到了100%,5.76μm/L的GA3和0.5μm/L的Karrikin最佳浓度下转化率也达到100%,GA3对胚轴伸长作用明显,Karrikin对胚根伸长和真叶数量作用明显。 4. 冷冻保护剂PVS2处理时间显著影响细胞存活率。PVS2处理70min时存活率最高为25.1%,再生率达到100%。长蕊木兰胚性愈伤组织超低温保存方法为:Loading(WPM + 2 M甘油 + 0.4 M 蔗糖)25℃处理20min;PVS2(WPM + 30%甘油 + 0.4 M 蔗糖 + 15%乙二醇 + 15%二甲基亚砜)0℃处理70min;40℃水浴解冻2min;Unloading(WPM + 1.2 M蔗糖)25℃处理20min。 |
并列题名: | Optimization of Somatic embryogenesis and cryopreservation of embryogenic cells in Alcimandra cathcartii |
题名主题: | 长蕊木兰 胚性愈伤组织 体细胞胚 超低温保存 学位论文 |
中图分类: | S718.46-533 |
个人名称等同: | 张宁 著 |
个人名称次要: | 赵雁 指导 |
团体名称等同: | 云南农业大学 授予 |
记录来源: | CN YNAUL 20240301 |