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： 盐酸血根碱对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 盐酸血根碱对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究/.顾叶卿著/.信吉阁指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.2 |
| 载体形态项： | 53页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240446 |
| 提要文摘： | 博落回（Macleaya cordata，M. cordata）是罂粟科植物、博落回属多年生直立草本植物，血根碱（Sanguinarine，SG）为M. cordata主要提取物之一，主要积聚在M. cordata的叶子中，约占总生物碱含量的61%，具有抗菌、抗炎及抗癌的特性。盐酸血根碱（Sanguinarine chloride hydrate，SGCH）为SG的盐酸盐形式，相对SG具有体内吸收快、分布快、代谢快，生物利用度较高、机体残留量少等优点。目前已有研究证明SG对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）的抗菌活性良好，但对SA系统的抑菌机制的研究，目前仍处于初步阶段。故本研究探究了SGCH对SA的体外抗菌活性及抗菌机制，测定了抑菌圈、最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration，MIC）和最低杀菌浓度（Minimum bactericidal concentration，MBC），绘制了时间–杀菌曲线；并且观测了SGCH对SA的微观形态、胞外DNA及蛋白质、AKP酶活性、Na+ K+、Ca2+ Mg2+-ATP酶活性、细胞膜通透性及胞内活性氧（Reactive oxygen species，ROS）等的影响。 （1）SGCH对SA抗菌活性的研究以SA、粪肠球菌（Enterococcus faecalis，E. faecalis）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，L. monocytogenes）、痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae，Sh. dysenteriae）和绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa，P. aeruginosa）作为受试菌。首先采用琼脂打孔法测量SGCH对SA的抑菌圈直径；其次采用微量二倍稀释法确定SGCH对SA的MIC和MBC；最后采用时间–杀菌曲线法评价SGCH对SA的抑菌效果。结果表明，SGCH在250、500、1000 μg/mL浓度下对革兰氏阳性菌的抑制效果大于阴性菌，其由强到弱具体表现为SA、E. faecalis、L. monocytogenes、Sh. dysenteriae、P. aeruginos，试验中三种浓度的SGCH抑菌效果均低于阳性对照盐酸金霉素（Chlortetracycline hydrochloride，CTC）；MIC和MBC值依次是128和256、256和512、512和1024、512和>1024、>1024和>1024 μg/mL；在时间–杀菌曲线中，8×MIC的SGCH能在24 h内彻底杀灭SA。体外抗菌活性结果发现，SGCH对SA的抑菌效果强于其他受试菌，其抑制能力不仅随着浓度的升高而提高，也随着处理时间的增加而相应增强。 （2）SGCH对SA抑菌机制的研究 通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscopy，SEM）观察不同浓度SGCH对SA细胞形态和超微结构的影响；通过OD260nm值测定SA胞内DNA含量变化，研究SGCH对胞内核酸泄漏的影响；采用BCA蛋白浓度测定试剂盒处理SA，并在OD562nm处测定吸光度值，来探究SGCH对SA胞内总蛋白含量变化的影响；用二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，FDA）染色实验研究SGCH对SA细胞膜通透性的影响；采用超微量Na+ K+、Ca2+ Mg2+-腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine triphosphate，ATP）酶测试盒和碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AKP）试剂盒处理SA，并在OD520nm及OD636nm处测定吸光度值，来探究SGCH对胞内酶活性的影响；分别使用活性氧（Reactive oxygen species，ROS）检测试剂盒处理SA 10 min、20 min和30 min，并在激发波长488 nm，发射波长525 nm处测定不同处理时间的荧光强度，并通过激光共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLEM）观察不同处理时间的SA胞内绿色荧光的差异，来探究SGCH对SA胞内ROS水平的影响，判断细胞是否被氧化损伤。结果显示，SEM观察到SGCH能明显破坏SA细胞的微观结构，使SA细胞发生皱缩、塌陷、细胞液漏出甚至互相黏连及结团现象。在DNA和蛋白质的测定中，2×MIC，4×MIC和8×MIC的SGCH在培养了24 h后分别使SA细胞泄露3.28、3.97和5.19 ng/μL的DNA以及48.27、100.80和188.27 μgprot/mL的蛋白质，与0×MIC具有极显著性差异（P＜0.001），呈明显的浓度依赖性。在FDA染色实验中，2×MIC，4×MIC和8×MIC的SA细胞检测到的荧光素显著低于0×MIC（P＜0.001），表明细胞膜的通透性被严重破坏。在酶活性的测定中，培养至24 h后，8×MIC的SGCH使SA胞外Na+ K+、Ca2+ Mg2+-ATP以及AKP活性极显著增加，结果表明SGCH不仅能破坏SA细胞膜的完整性，增加了Na+ K+及Ca2+ Mg2+离子的通透性，还能破坏SA的细胞壁，使胞内AKP泄露。除此之外，2×MIC作为诱导细菌产生ROS的最适浓度，在培养了30 min后，测定的荧光强度为9.52，极显著高于0×MIC（P＜0.001），SGCH使SA细胞产生氧化损伤。体外抑菌机制结果发现，SGCH能明显破坏SA细胞的微观结构，还能通过破坏SA细胞膜和细胞壁的完整性和通透性，导致SA胞外DNA、蛋白质、FDA以及Na+ K+、Ca2+ Mg2+-ATP和AKP酶活性的显著增加。此外，SGCH还能诱导SA产生大量ROS。 综上所述，研究揭示了SGCH对SA具有明显的抑制效果，且SGCH通过破坏SA细胞微观结构、细胞膜和细胞壁的通透性和完整性，细胞氧化损伤等发挥抗菌作用，为畜牧养殖中使用SG作为抗生素代替以及临床上防治SA引起的疾病提供了理论依据。 |
| 并列题名： | Study on the Antibacterial Effects of Sanguinarine chloride hydrate against Staphylococcus aureus eng |
| 题名主题： | 血根碱 盐酸血根碱 金黄色葡萄球菌 抑菌作用 细胞壁及细胞膜损伤 氧化损伤 学位论文 |
| 中图分类： | S855.11-533 |
| 个人名称等同： | 顾叶卿 著 |
| 个人名称次要： | 信吉阁 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240529 |