书目详细信息
： 烟草青枯雷尔氏菌和疫霉菌分子检测及土壤微生物分析
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 烟草青枯雷尔氏菌和疫霉菌分子检测及土壤微生物分析/.杜文英著/.刘冠泽指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.8 |
| 载体形态项： | 41页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 烟草学院, 学号2021240562 |
| 提要文摘： | 烟草土传病害严重危害烟叶生产，其防治也是世界难题，其中分别由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）、烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）引发的青枯病、黑胫病是烟叶生产主要的两种土传病害，常混合发生而造成严重的经济损失。快速准确鉴定两种病原菌，对诊断病害和及时预防具有重要意义。本试验以青枯雷尔氏菌中 RsfliC基因，烟草疫霉菌特有的半胱氨酸蛋白酶基因 Pp Cys45为靶标序列，建立可以快速准确检测两种土传病害的环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）体系，检测结果肉眼可见、特异性与灵敏性强，反应条件简单，并通过人工接种青枯雷尔氏菌调查土壤中微生物种群变化。主要研究结果如下： 1. 以青枯雷尔氏菌RsfliC基因和烟草疫霉菌PpCys45基因为目标基因序列，设计特异性检测引物。通过对LAMP 反应体系中引物浓度、温度、反应时间、MgSO4、dNTP、甜菜碱的优化，以 SYBR Green I 为染料，建立了青枯雷尔氏菌和烟草疫霉菌的LAMP快速检测体系。在两种病原菌特异性检测中，目标病原菌LAMP 检测反应呈荧光黄绿色，对照病原菌 LAMP 检测反应呈橙色；灵敏度检测结果表明，青枯雷尔氏菌LAMP 检测灵敏度可达10 -6 ng/μL，比普通PCR 灵敏度提高10 4倍；烟草疫霉菌LAMP 检测灵敏度可达10 -5 ng/μL，比普通PCR 灵敏度提高100倍。 2. 利用已建立的LAMP检测体系，对不同来源的36份根际土壤样品进行青枯雷尔氏菌和烟草疫霉菌LAMP分子检测。结果表明，有29份土样中可同时检出青枯雷尔氏菌和烟草疫霉菌两种病原菌，有1份土样仅检出青枯雷尔氏菌，有3份土样仅检出烟草疫霉菌，有3份土样两种病原菌均未检出，与田间植株病症形态观察存在着较大差异。因此，LAMP分子检测体系的建立可以及时检测出相应病害，起到早预防，并采取针对性的防治措施，减少用药滞后和滥用造成的烟叶生产中经济损失和环境污染。 3. 通过灌根法将青枯雷尔氏菌以106 cfu/mL定量浇入种植红花大金元和云烟87的灭菌土中于7天、14天、21天取根际土壤，测序分析不同烟草品种接青枯雷尔氏菌后土壤微生物群落的变化。结果如下：（1）比较侵染后两个烤烟品种土壤细菌群落在门水平上的变化分析可知，青枯雷尔氏菌的侵染后土壤细菌群落主要以变形菌门（Proteobacteria）、Patescibacteria菌门、厚壁菌门（Firmicutes） 、拟杆菌门（Bacteroidota）为主；（2）通过对侵染后土壤细菌群落Shannon指数和 ACE 指数的动态变化特征可知，青枯雷尔氏菌的侵染可降低红花大金元和云烟87土壤细菌群落的丰富度和均匀度，且红花大金元的细菌群落丰富度和均匀度低于云烟87；（3）对于两个烤烟品种的PCoA分析可知，青枯雷尔氏菌侵染显著改变红花大金元与云烟87土壤细菌群落结构，且细菌群落随青枯雷尔氏菌侵染时间推移而产生显著变化，而侵染后21天不同烤烟品种间土壤细菌群落较为稳定；（4）基于土壤细菌属水平分类物种VENN分析可知，青枯雷尔氏菌侵染可改变红花大金元与云烟87土壤的细菌属水平群落结构，随青枯雷尔氏菌侵染时间推移，红花大金元土壤细菌属水平独有菌属数量持续减少，云烟87土壤细菌属水平独有菌属呈先增加后降低的趋势。结果表明，青枯雷尔氏菌侵染对不同烤烟品种土壤细菌影响存在差异，青枯雷尔氏菌侵染红花大金元使土壤细菌物种丰富度持续下降，侵染云烟87引起土壤细菌群落产生一定抵御反应。 综上所述，以青枯雷尔氏菌RsfliC基因和烟草疫霉菌PpCys45基因为目标基因序列建立的青枯雷尔氏菌和烟草疫霉菌的LAMP快速检测体系特异性强、灵敏度高，可及时检测出目标病害，起到早预防，并采取针对性的防治措施，减少用药滞后和滥用造成的烟叶生产中经济损失和环境污染。通过灌根法对红花大金元和云烟87的青枯雷尔氏菌侵染根际土壤的测序分析，发现青枯雷尔氏菌侵染对不同品种土壤细菌影响存在差异，侵染红花大金元使土壤细菌物种丰富度持续下降，侵染云烟87引起土壤细菌群落产生一定抵御反应。 |
| 并列题名： | Ralstonia solanacearum and Phytophthora nicotiana molecular detection and soil microbiological analysis in Nicotiana tabacum eng |
| 题名主题： | 烟草 青枯雷尔氏菌 烟草疫霉菌 LAMP 红花大金元 云烟87 土壤细菌群落 学位论文 |
| 中图分类： | S572-533 |
| 个人名称等同： | 杜文英 著 |
| 个人名称次要： | 刘冠泽 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240528 |