书目详细信息
： 猪非典型瘟病毒云南株变异基因Mut与宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 猪非典型瘟病毒云南株变异基因Mut与宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定/.姜光飞著/.杨玉艾指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 77页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210418 |
| 提要文摘： | 近几年，猪非典型瘟病毒（Atypical Porcine Pestivirus，APPV）在世界多个养猪国家相继报道，临床症状呈不典型性，给养猪业造成了一定的经济损失。课题组前期研究发现，APPV-YN（云南株）E2基因3 152～3 176位变异是导致其非典型化的关键基因，并将其命名为Mut，但是起关键作用的蛋白及其分子作用机制仍然不清楚。 为进一步了解APPV-YN Mut与宿主细胞哪些蛋白存在互作，又是如何通过蛋白的互作调控胞内信号通路，深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其非典型化机制。本研究利用酵母双杂交技术构建了猪静脉血管内皮细胞（SVEC）cDNA文库，并进一步采用建立的SVEC cDNA文库与诱饵质粒pGBKT7-Mut共转Y2H Gold酵母菌，筛选与Mut蛋白相互作用的蛋白，对筛选出的蛋白进行测序和生物信息学和蛋白功能分析；并结合分析结果对主要潜在互作蛋白进行GST polldown、免疫共沉淀和共定位验证，取得了以下结果： （1）APPV-YN Mut与宿主SVEC潜在互作蛋白的筛选。结果显示，诱饵质粒pGBKT7-Mut可在酵母菌中表达，无毒无自激活，可用于酵母双杂交筛选。文库质量评价结果显示，构建的SVEC cDNA文库容量大于1×106cfu/mL，文库滴度6.2×106cfu/mL，PCR显示文库插入片段大小在250 bp～3 000 bp，条带大小不一，符合文库大小要求。经互作筛选，最终得到14种蛋白，NME2、GAPDH、RPS25、PHGDH、CKB、ACTG1、HINT1、RPS26、SSR4、CTSH、AKT1、POP7、S100A2和STIP1。 （2）APPV-YN Mut与宿主SVEC潜在互作蛋白的生信和功能分析。对筛选得到的14种蛋白进行生信分析和功能分析，生信分析结果表明，NME2、GAPDH、PHGDH、RPS25、RPS26、ACTG1、HINT1、CKB这8种蛋白是显著节点蛋白，各显著节点蛋白除了与Mut互作外，彼此之间互作较多；而CTSH、SSR4、POP7、STIP1、AKT1、S100A2这6种蛋白属于次显著节点蛋白，只跟Mut有相互作用。蛋白功能分析显示，这些蛋白大部分跟病毒复制、病毒毒力、信号转导、免疫应答、蛋白酶系统、细胞凋亡自噬和钙通道有关。 （3）APPV-YN Mut与宿主SVEC主要互作蛋白互作的验证。结合生信分析和蛋白功能分析结果，对APPV-YN Mut与SVEC主要互作蛋白（CTSH和SSR4）的互作关系进行验证。GST polldown和免疫共沉淀结果表明Mut与CTSH和SSR4在体内和体外都有相互作用。共定位结果显示，Mut、CTSH和SSR4主要定位于细胞质中，互作主要发生在细胞核内；Mut蛋白和SSR4蛋白每间隔3 h～4 h左右完成一次入核，每3 h左右在细胞核内进行一次互作；Mut蛋白和CTSH蛋白每间隔4 h左右完成一次入核，每10 h左右在细胞核内进行一次互作。 综上所述，本研究初步筛选到与APPV-YN Mut存在潜在互作关系的14种宿主SVEC，结合生信分析和蛋白功能分析对与APPV-YN Mut存在主要互作关系的两种潜在蛋白（CTSH和SSR4）的互作关系进行了进一步的验证，并初步明确了CTSH和SSR4蛋白与APPV-YN Mut互作的规律，为阐明APPV-YN Mut与宿主细胞相互作用的途径及细胞内相关信号反应提供了理论基础，对于研究APPV胞内入侵及其与APPV非典型化机制十分重要。 |
| 并列题名： | Screening and identification of the interacting proteins between APPV-YN Mut and host cells |
| 题名主题： | 猪非典型瘟病毒 APPV-YN Mut 酵母双杂交 cDNA文库 蛋白互作 学位论文 |
| 中图分类： | S858.28-533 |
| 个人名称等同： | 姜光飞 著 |
| 个人名称次要： | 杨玉艾 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |