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： 水牛ADFP基因的分离鉴定及其在乳脂合成中的功能研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 水牛ADFP基因的分离鉴定及其在乳脂合成中的功能研究/.翟婧著/.苗永旺指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.30 |
| 载体形态项： | 68页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院, 学号2020210356 |
| 提要文摘： | ADFP基因编码脂滴包被蛋白2，对细胞内脂滴形成起着重要作用，在脂质储存和代谢的调节、脂肪酸的氧化等多种生理功能中也发挥重要作用。已有研究报道，在小鼠、奶山羊的乳腺上皮细胞中，ADFP可促进脂滴的生成和乳脂球的分泌，但该基因在水牛乳脂合成过程中所发挥的具体功能尚不清楚。ADFP基因功能多样性可能与其可变剪切的发生存在有着密切的关系，目前未有关于水牛ADFP基因可变剪接体鉴定的相关研究。研究以水牛乳腺组织cDNA为模板，通过RT-PCR技术对水牛ADFP基因分离鉴定，确定该基因是否存在多种选择性剪接异构体；对所获得编码产物进行生物信息学分析，初步研究其基本功能；采用qPCR技术检测初步确定在水牛乳腺组织中发挥主要功能作用的选择性剪接体；进一步通过体外细胞水平的功能实验验证ADFP在水牛乳脂合成过程中的功能；检测了水牛ADFP基因在水牛9个组织中的mRNA相对表达量，分析该基因的组织表达特异性。得到如下结果： （1）获得了水牛ADFP基因的4种可变剪接异构体，命名为ADFP_X1、ADFP_X3、ADFP_X4和ADFP_X6，分别长1425bp、1353bp、1344bp和1218bp，编码475、450、447和405个氨基酸。水牛中所获得序列与普通牛、山羊、绵羊等牛科物种相比较序列一致性在96%~99.8%，序列差异性较小。ADFP_X1、ADFP_X3、ADFP_X4与NCBI数据库所预测的ADFP剪接异构体完全一致，ADFP_X6为本研究新发现的异构体，与ADFP_X1、ADFP_X3、ADFP_X4序列一致性分别为97.8%、98%、91.5%。除ADFP_X6外，其余3个剪接异构体都有完整的功能结构域，ADFP_X6却有45个氨基酸缺失，不具有完整的功能结构域。 （2）ADFP基因的4个剪接异构体在泌乳期和非泌乳期的乳腺组织中都有表达，ADFP_X3、ADFP_X4和ADFP_X6的表达水平显著高于ADFP_X1（P<0.001），同时ADFP_X3、ADFP_X4和ADFP_X6的表达量在泌乳期都显著高于非泌乳期（P<0.001），ADFP_X3、ADFP_X4和ADFP_X6在不同泌乳时期有不同的表达丰度，表明ADFP基因可能参与水牛的泌乳过程。 （3）在乳腺上皮细胞中过表达ADFP_X3后，乳脂合成相关基因PPARG、LPL、SCD、FASN、SREBP-1c表达量显著上升，同时乳腺上皮细胞内甘油三脂含量和脂滴积累极显著增加（P<0.01）；而过表达ADFP_X4后，乳腺上皮细胞内甘油三脂含量呈显著上升趋势（P<0.05），但乳脂合成相关基因表达量上升趋势和脂滴变化不显著。由于无法干扰某一特定的可变剪接体，因此干扰整个ADFP基因的转录过程。在乳腺上皮细胞中干扰ADFP_X3后，乳脂相关基因PPARG、LPL、SCD、FASN、SREBP-1c表达量显著下降，同时乳腺上皮细胞内脂滴数量减少、脂滴体积显著减小。表明ADFP基因4个可变剪接体中ADFP_X3是水牛乳脂合成过程中发挥主要作用的剪接异构体。 （4）利用实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测了水牛ADFP_X3在水牛9个组织中的相对表达量，结果显示ADFP_X3在泌乳期水牛的所有组织中均表达，在乳腺组织中有较高水平的表达（P<0.01），其次是心脏和肌肉，在肾脏、肺和大脑中表达量相对较低。 本研究结果表明，ADFP在水牛乳腺上皮细胞脂肪合成过程中扮演更重要角色，其主要作用是调节脂滴的分泌与脂滴大小；在乳腺中获得的4个剪接异构体中，ADFP_X3在水牛乳脂合成过程中发挥主要作用。此外，本研究也揭示 ADFP基因可通过PPAR信号通路参与乳腺上皮细胞中乳脂的合成过程。本研究结果可为解析奶水牛乳脂合成机制提供依据，具有重要科学价值，也可为开展水牛分子育种工作提供参考。 |
| 并列题名： | Isolation and identification of buffalo ADFP gene and its function in milk fat synthesis eng |
| 题名主题： | 水牛 ADFP基因 选择性剪接 乳脂合成 脂滴 学位论文 |
| 中图分类： | S823.91-533 |
| 个人名称等同： | 翟婧 著 |
| 个人名称次要： | 苗永旺 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240527 |