书目详细信息
： 藜麦脱落酸相关基因的克隆及表达分析
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 藜麦脱落酸相关基因的克隆及表达分析/.陈凡著/.郭凤根指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.6 |
| 载体形态项： | 89页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 农学与生物技术学院, 学号2020210127 |
| 提要文摘： | 藜麦具有食用、饲用、药用、观赏等多方面的开发价值，但是藜麦穗发芽消耗了种子中的营养物质，使其品质严重下降。 ABA 广泛分布于植物的各种组织、器官，对植物的生长发育发挥着至关重要的调控作用，ABA 的合成、分解以及信号转导途径成为解析 ABA 作用机制的重点，而对于 ABA 在藜麦生长发育过程中调控机制的研究鲜见报道。依据前期藜麦穗发芽抗性评价结果，本研究以抗穗发芽的SBQ1、WQ4、RQ22和易穗发芽的BBQ3、WQ6、RQ14为材料，采用生物信息学分析方法和分子生物学技术，筛选 ABA 生物合成、分解以及信号转导相关基因，克隆了6个ABA相关基因；探究ABA和氟啶酮对黑、白两种粒色藜麦种子萌发、ABA含量以及NCED、8′OH和ABI3基因表达的影响；并对NCED和8′OH进行了异源表达，探究ABA 相关基因在藜麦穗发芽中的调控机制。具体研究结果如下： 1、采用同源搜索的方法从藜麦基因组数据库筛选出7个ABA相关基因，包括VDE、ZEP、NCED、AAO、SDR、8′OH和ABI3基因。以筛选出的基因序列为参考序列，在6份藜麦材料中分别进行克隆，最终克隆获得了6个基因的全长cDNA序列。 2、对6份藜麦材料的根、茎、叶和种子中的7个基因进行表达模式分析，发现不同藜麦材料、不同器官中ABA相关基因的相对表达量存在显著差异。VDE、ZEP主要在叶片中表达；NCED主要在黑藜的根和茎、白藜的根、红藜的茎和叶中表达；SDR主要在根和种子中表达；AAO主要在根中表达；8′OH在黑藜的根和种子、白藜的根、红藜的茎中表达；ABI3主要在种子中表达。ZEP、NCED、8′OH基因表达量高于其他基因，ABI3在种子中特异表达，推测这4个基因在藜麦穗发芽调控中起关键作用。 3、外源ABA和FL处理种子后，各浓度外源 ABA 对各藜麦材料种子萌发均有抑制作用，并以25umol·L-1浓度效果最佳；外源施加低浓度FL对各藜麦材料种子萌发有促进作用，且施用2.5umol·L-1浓度即可。外源ABA和FL处理可显著提高或降低藜麦种子的内源ABA含量，在发芽率降低和升高的幅度上SBQ1和WQ4分别小于BBQ3和WQ6，萌发9h时SBQ1和WQ4在种子内源ABA含量上分别显著高于BBQ3和WQ6，这与穗发芽抗性评价结果相符。外源ABA和FL处理后藜麦种子的ABA相关基因的表达呈现一定的差异：对照组中，抗穗发芽的SBQ1和WQ4在NCED、8′OH、ABI3的表达量上分别高于易穗发芽的BBQ3和WQ6；外源ABA处理下，SBQ1的NCED和ABI3表达量在12h才显著上调，而BBQ3的3个基因表达量均在6h时就显著上调，同时WQ4的3个基因表达量上调时间也迟于WQ6；外源FL处理下，SBQ1中3个基因表达量均上调，但NCED表达量明显低于8′OH，BBQ3中NCED和 ABI3的表达量下调，8′OH表达量显著上调； FL抑制WQ4中NCED和8′OH的表达，对其ABI3无显著调控作用，而对WQ6的8′OH基因表达的促进作用高于NCED基因。这些结果表明NCED、8′OH、ABI3基因在藜麦穗发芽中具有重要作用。 4、构建藜麦NCED、8’OH基因表达载体，瞬时表达分析发现pC2300空载体定位在烟草叶片细胞膜和细胞核中，重组质粒 pC2300-NCED定位在叶绿体和细胞质中，pC2300-8’OH定位在内质网中；将载体分别转化至野生型拟南芥，通过PCR检测成功获得了1株8’OH和2株NCED超表达转基因植株；通过qRT-PCR分析发现，与野生型拟南芥相比，转NCED和8’OH植株的基因表达量显著增高。在霍格兰培养基上，转基因株系（8S3）萌发率高于野生型（WT），且长势快于WT，说明8′OH基因过表达使拟南芥对ABA的敏感性提高；且8S3在种子和叶片的ABA含量上均低于WT，而8’OH基因是ABA分解途径中的关键基因，说明藜麦中克隆获得的8’OH基因具有功能，且与预期相符。 综上所述，藜麦穗发芽抗性的分子机制是通过上调NCED等基因的表达和下调8′OH的表达来维持较高水平的脱落酸，从而抑制种子萌发。 |
| 并列题名： | Cloning and Expression Analysis of Abscisic Acid Related Genes in Chenopodium quinoa Willd. eng |
| 题名主题： | 藜麦 脱落酸 穗发芽 ABA相关基因 表达分析 学位论文 |
| 中图分类： | S519-533 |
| 个人名称等同： | 陈凡 著 |
| 个人名称次要： | 郭凤根 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240528 |