糖尿病作为一种综合性代谢疾病，其发病率呈逐年上升的趋势。糖尿病存在多种并发症，其中伤口愈合缓慢是一类典型的并发症（如糖尿病足），严重干扰了糖尿病病人的日常生活，给病人的家庭和社会医疗条件带来了沉重的负担。然而，现有针对伤口愈合缓慢的治疗策略主要是降糖，且临床上没有治疗伤口愈合缓慢的药物，这种现象造成糖尿病病人无法接受手术或在手术以后需要进行降糖治疗来改善伤口愈合，因此，关于有效预防和治疗糖尿病伤口愈合障碍的研究具有重要的临床意义。研究表明，持续存在的慢性炎症是引起糖尿病伤口愈合过程紊乱的主要原因。巨噬细胞作为伤口位置主要的炎症细胞，是炎症因子分泌的主要来源之一，其功能失调是造成伤口愈合缓慢的主要病理因素。前期研究表明，在糖尿病伤口愈合过程中Notch能够调节巨噬细胞介导的炎症，抑制Notch信号可降低糖尿病皮肤伤口处的炎症水平，继而促进伤口愈合。前期研究表明，在细胞水平上，表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）能够靶向Notch减弱人的巨噬细胞介导的早期炎症反应。因此，假设EGCG能够通过靶向Notch促进糖尿病伤口愈合。为了验证这一假设，以链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠和小鼠巨噬细胞（RAW264.7）为研究模型，以EGCG为试样,使用ELISA、WB、IHC和生物分子相互作用等研究方法，通过细胞和动物实验进行了EGCG对糖尿病小鼠伤口愈合的影响及其作用机理的研究。
本研究通过在糖尿病小鼠背部进行全皮切除，建立伤口模型，建模后马上局部涂抹给药EGCG（10 ug/mL，每天一次，持续14天），并在不同时间点观察伤口愈合情况。结果表明，EGCG具有促进糖尿病小鼠伤口愈合的作用。与模型组相比，EGCG处理组的伤口愈合率在第五天（day 5，p=0.045）、第七天（day 7，p=0.029）、第八天（day 8，p=0.041）显著性增加，较模型组分别提高了16.62%、12.29%和9.26%，其愈合水平接近正常组小鼠。为进一步阐明EGCG促进糖尿病小鼠伤口愈合的作用，应用组织形态学检测提高day 8时间点的皮肤伤口再上皮化和胶原蛋白沉积水平。结果表明，经过EGCG处理，糖尿病模型小鼠皮肤伤口的再上皮化率提高了9.86%，胶原蛋白沉积的水平提高了3.11%，这些指标恢复到与正常小鼠相当的水平。
为了探索EGCG促进糖尿病伤口愈合的作用机制，使用ELISA法检测了EGCG对糖尿病小鼠皮肤伤口组织中炎症因子水平的影响。取day8时间点的皮肤伤口组织，对伤口组织中的炎症因子白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素10（IL-10）、白介素6（IL-6）的分泌水平进行检测。结果发现，EGCG显著性地抑制了促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6在伤口组织中的分泌，同时促进了抗炎因子IL-10的分泌，说明EGCG能够显著抑制皮肤伤口愈合增殖期的炎症反应。为了进一步探究EGCG调节糖尿病小鼠皮肤伤口组织炎症反应的机理，应用免疫组化法（IHC）检测了EGCG对day8时间点的皮肤伤口组织中巨噬细胞的影响。结果显示，与模型组相比，EGCG处理能够显著降低F4/80蛋白的表达水平，说明经过EGCG能够减少糖尿病小鼠伤口组织中巨噬细胞的积累。由于巨噬细胞在皮肤组织中分为促炎（M1）和抗炎（M2）两种表型，为了明确EGCG对不同表型巨噬细胞的影响，进一步通过IHC检测M1型巨噬细胞标记物iNOS和M2型巨噬细胞的标记物CD163的水平。结果显示，与模型组相比，EGCG可显著减少M1型巨噬细胞的数量，增加M2型巨噬细胞的数量，使糖尿病小鼠皮肤伤口中的M1/M2比值恢复到正常小鼠水平。为了证明EGCG调节巨噬细胞功能是通过Notch信号而实现的，取day 8时间点的伤口组织，通过WB、IHC检测了EGCG对皮肤伤口组织中Notch蛋白表达水平的影响。结果发现，EGCG能够显著的抑制Notch1和Notch2蛋白的表达。
进一步地，在小鼠巨噬细胞上验证了EGCG通过Notch调节巨噬细胞介导的炎症反应。结果显示，EGCG可显著的抑制LPS诱导的IL-1β分泌和Notch1、Notch2蛋白表达水平的升高。同时，Notch1的激活（Cleaved-Notch1）被显著性地抑制。为了探究EGCG作用于Notch蛋白的分子机理，使用生物大分子相互作用仪检测了EGCG与Notch1的相互作用情况。结果表明，EGCG与Notch1蛋白能够特异性结合，KD值为2.04*10^-6。以上实验结果说明，EGCG可直接作用于Notch1，降低Notch1/2的表达和激活，进而减弱糖尿病小鼠皮肤伤口组织中巨噬细胞介导的炎症反应，促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合。
为了观察EGCG对糖尿病慢性难愈合伤口的治疗作用，在糖尿病小鼠皮肤伤口愈合过程的炎症末期（day 4）开始涂抹给药，评估EGCG的作用。结果发现，EGCG可以增加伤口愈合过程中增殖期（day 8）伤口组织的再上皮化和胶原蛋白沉积，降低伤口组织中的IL-1β、TNF-α等炎症因子分泌水平，抑制Notch蛋白的表达，减少巨噬细胞的积累，促进糖尿病皮肤伤口愈合，说明EGCG对糖尿病慢性伤口愈合具有治疗作用。
综上所述，本文阐明了EGCG促进糖尿病小鼠伤口愈合的作用，其机制是通过靶向Notch蛋白调节巨噬细胞介导的炎症反应，这些研究结果为糖尿病伤口愈合提供了一种新的治疗策略,也说明了EGCG在治疗糖尿病慢性伤口愈合的应用中具有巨大潜力。