书目详细信息
： 茶多酚和茶黄素抑制RAW264.7细胞炎症因子表达的机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 茶多酚和茶黄素抑制RAW264.7细胞炎症因子表达的机制研究/.张晨著/.方崇业指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.5 |
| 载体形态项： | 87页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 茶学院, 学号2020210221 |
| 提要文摘： | 茶多酚（Tea Polyphenols, TPs）是茶树的主要次级代谢产物，由多种酚类及其衍生物组成，是茶叶中的主要活性成分之一，其中大部分是儿茶素，约占茶叶中的12%-24%。研究表明茶多酚具有广泛的药理作用诸如减肥、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、抗癌、抗炎抑菌等。茶黄素（Theaflavins, TFs）是TPs氧化聚合的产物，主要结构是一个七元苯丙邻酚酮环，是红茶中主要的功能性植物化学物质之一，占红茶中固形物的1%-5%，是红茶滋味和汤色的主要品质。研究表明，TFs混合物或单体在抗氧化、降脂、抗炎、抗肿瘤等多个方面均有功效。两者作为茶叶中的天然化学成分，均具有广阔的研究价值及发展前景。炎症（Inflammation）是机体在外来物质入侵，如细菌和病毒进入身体时，对其做出的天然防御机制，是一个复杂的病理过程。慢性炎症反应与多种疾病（炎症性肠病、关节炎、哮喘、阿尔兹海默症帕金森病和糖尿病等）息息相关，对人类健康有着不可忽视的影响。茶叶中的生物活性物质如TPs和TFs均具抗氧化、抗肿瘤、抑菌消炎等作用，其中茶叶抗炎活性尤为显著。 本研究旨在通过Cell Counting Kit-8（CCK-8）法，Griess法, Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction（qRT-PCR）, Enzyme Linked Immunosorbent Assay（ELISA）以及转录组测序等方法讨论TPs和TFs的体外抗炎作用及其作用机理。主要研究内容与结果如下。 （1）CCK-8法检测TPs和TFs对RAW264.7细胞毒性的影响 在经脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导后的RAW264.7细胞里加入不同浓度的TPs和TFs后，细胞的毒性下降，并且随着TPs浓度的增加，光密度（Optical Density, OD）值也逐渐降低，说明细胞的毒性随TPs浓度的增加而降低；当TFs浓度为中等浓度时，OD值最低，说明此时细胞毒性最小。 （2）Griess法检测TPs和TFs对RAW264.7细胞分泌一氧化氮(Nitric Oxide, NO）的影响 在经LPS诱导后的RAW264.7细胞里加入不同浓度的TPs和TFs，即低、中、高浓度的TPs和TFs后，细胞NO分泌量下降，说明TPs和TFs均可以降低RAW264.7细胞NO分泌量且呈浓度依赖性。 （3）qRT-PCR检测TPs和TFs对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子信使RNA（Messenger RNA, mRNA）表达量的影响 在经LPS诱导后的RAW264.7细胞里加入不同浓度的TPs和TFs后，实验结果表明：与LPS组相比，高浓度的TPs，TFs可以使LPS诱导的RAW264.7炎症细胞中肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α）、白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6, IL-6） mRNA的表达下调（P<0.05）。 （4）ELISA检测TPs和TFs对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响 在经LPS诱导后的RAW264.7细胞里加入不同浓度的TPs和TFs后，实验结果表明，TNF-α在低浓度（25 μg/mL）的TPs和TFs的作用下与LPS组相比无明显的下降（P>0.05），在中（50 μg/mL）、高（100 μg/mL）浓度的TPs，TFs作用下的TNF-α与LPS组相比有显著下降（P<0.05）；低（25 μg/mL），中（50 μg/mL），高（100 μg/mL）浓度的TPs和TFs与LPS组相比，IL-1β有显著下降；在低浓度的TPs作用下，IL-6含量与LPS组相比没有显著下降，中、高浓度的TPs作用下，IL-6与LPS相比显著下降；低、中、高浓度的TFs的作用下与LPS组相比，IL-6都有显著下降（P<0.05）。说明TPs和TFs可以显著下调RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6三种炎症因子的表达量。 （5）转录组测序分析TPs和TFs抗炎作用机制 为了进一步确定其作用机制，对LPS组，高浓度作用下的TPs组和TFs组进行转录组测序分析。转录组测序结果显示，TPs组vs LPS组共筛选出1562个差异表达基因；TFs组vs LPS组共筛选出905个差异表达基因；TPs组vs TFs组共筛选到502个差异表达基因。Gene Ontology（GO）富集显示，TPs和TFs主要对巨噬细胞的生物过程（Biological process，BP）影响最显著，在这些BP中，显著差异表达的基因如il15, cd86, il6，fas，cxcl10，il6，rb1，h2-t23，h2-d1，cd40等与炎症因子分泌相关。Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）富集显示，TPs vs LPS组有19条通路显著富集；TFs vs LPS组有6条通路显著富集；TPs vs TFs组有16条通路显著富集，其中同种异体移植排斥反应（Allograft Rejection）、抗原处理和呈递（Antigen Processing and Presentation）等都与免疫系统有关。对差异表达基因（Differentially Expressed Genes，DEGs）进行Protein-Protein Interaction Networks（PPI）网络互作分析获得一系列核心基因如il15, il15ra和itga4等均与免疫功能相关。 综上，本文通过CCK-8法，Griess法, qRT-PCR以及ELISA等方法，初步揭示了TPs和TFs可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子；通过转录组测序分析揭示了TPs和TFs抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的潜在机制，为TPs、TFs的进一步开发利用提供了科学依据。 |
| 并列题名： | Study on the Mechanism of Tea Polyphenols and Theaflavins Inhibiting the Expression of Inflammatory Factors in RAW264.7 Cells |
| 题名主题： | 茶多酚 茶黄素 抗炎活性 RAW264.7细胞 脂多糖 转录组测序 学位论文 |
| 中图分类： | S571.1-533 |
| 个人名称等同： | 张晨 著 |
| 个人名称次要： | 方崇业 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |