书目详细信息
： 水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定/.李梦婷著/.陈丽娟, 李东宣指导 |
| 出版发行项： | 2019.05.29 |
| 载体形态项： | 60页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 育性是水稻能持续不断繁殖的重要基础。利用RNAi干扰技术，对育性相关基因进行发掘和研究，可为水稻雌性不育或雄性不育的基因操作和遗传工程提供新材料和新策略。本研究筛选了9个重要的参与生殖发育调控基因，这些基因分别调控水稻花粉、卵细胞和合子胚的发育。通过构建9个基因的 RNAi 干扰载体，农杆菌转化，转基因植株鉴定以及转基因植株的部分表型分析，来简单确定目标序列的对靶标性状的沉默效率，以期选出干扰效应和综合性状表现良好的目的序列。研究主要结论如下： 1、目的基因筛选：经文献阅读和相关网站搜索，最终确定了9个与生殖发育调控密切相关的基因，设计了9个基因的RNAi目的序列。其中，AT61—AT63通过干扰花粉发育相关的基因来调控花粉发育，AT64—AT66通过干扰卵细胞发育相关的基因来调控卵细胞发育，AT67—AT69通过干扰合子胚发育相关的基因来调控合子胚发育，设计了相对应的引物，扩增得到了9个目的序列。 2、RNAi载体构建与遗传转化：分别构建了9个目的序列的 RNAi双元表达载体（pCaMV35S::AT6x:RNAi；x：1-9），通过根癌农杆菌介导的遗传转化，获得了相应的遗传表达载体的阳性转基因植株。其中，使用DF6176粳稻品系转化的AT61 和AT62 RNAi 载体的转基因植株分别有3株和5株，使用粳稻品种 Ilmibyeo转化的AT63、AT65、AT66、AT67、AT68和AT69的 RNAi 载体的转基因植株分别有8、10、7、7、3和3株。 3、转基因植株T0代花粉育性：花粉碘染检测表明，野生型粳稻品种 Ilmibyeo中正常花粉粒的比率高达98.1±0.9%；AT61-RNAi—AT63-RNAi的转基因植株正常花粉粒比率均低于野生型。其中，AT62-RNAi的正常花粉粒比率最低，平均值为56.8%±36.7%； AT65-RNAi和AT66-RNAi 植株正常花粉粒比率的平均值分别为80.0±24.6%和86.4±14.5%； AT67-RNAi—AT69-RNAi阳性转基因植株中，AT68-RNAi正常花粉粒比率高达90.8±2.4%，而AT67-RNAi和AT69-RNAi正常花粉粒比率平均值分别为46.2±40.0%和49.2±36.3%，较低。 4、转基因植株T0代结实率：野生型的结实率为94.0±1.0%，AT61-RNAi的结实率为69.7±11.1%，AT62-RNAi和AT63-RNAi的结实率较低，均在30%左右；AT65-RNAi和AT66-RNAi的结实率较低，分别为39.5±26.1% 和49.9±14.0%；AT67-RNAi和AT68-RNAi的结实率在30%左右，AT69-RNAi的结实率只有10%。 5、T0代种子的潮霉素发芽率结果：利用潮霉素发芽来大致确定T0代转基因种子和非转基因种子的比例。AT61-RNAi和AT62-RNAi的发芽率较低，均在28%左右，而AT6- RNAi 3的发芽率高达84.6%；AT65-RNAi的发芽率为38.5%，比AT66-RNAi的发芽率（61.5%）低；AT67-RNAi的发芽率为78.6%，AT68-RNAi的发芽率为30.8%。 6、AT61-RNAi -AT69-RNAi对靶标性状的干扰效应：AT61、AT62和AT63对目标性状的干扰效应分别为46.4%、48.3%和-9.6%，其中，AT62的干扰效应最强；AT65和AT66的干扰效应为36.5%和13.5%，前者大于后者，AT65的干扰效应较强；AT67和AT68的干扰效应为-3.6%和44.2%，后者明显大于前者，AT68的干扰效应更强。 综上所述，对T0代转基因植株的花粉育性、结实率和潮霉素筛选发芽率检测以及RNAi干扰效应的估算结果显示，RNAi 表达载体AT62（花粉发育调控）、AT65（卵细胞发育调控）和AT67（合子胚发育调控）的干扰效应较强。该结果将为创制新型水稻基因工程不育系提供策略和选择。 |
| 并列题名： | RNAi Vector Construction and Genotypic Identification of Genes Regulating the Fertilities in Rice (Oryza sativa L.) eng |
| 题名主题： | 水稻(Oryza sativa) 育性 花粉调控 卵细胞调控 合子胚调控 学位论文 |
| 中图分类： | S511-533 |
| 个人名称等同： | 李梦婷 著 |
| 个人名称次要： | 陈丽娟 指导 |
| 个人名称次要： | 李东宣 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200313 |