书目详细信息
： RAG2基因敲除猪构建及其免疫缺陷验证
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | RAG2基因敲除猪构建及其免疫缺陷验证/.王锋冲著/.魏红江指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.30 |
| 载体形态项： | 47页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院, 学号2020210346 |
| 提要文摘： | 免疫缺陷动物在人类免疫缺陷疾病发病和治疗研究，以及肿瘤动物模型和人源化动物模型的构建中发挥重要作用。重组激活基因（recombination-activating genes，RAG）在V(D)J重组过程中发挥重要作用，RAG2 基因敲除（knockout，KO）可在早期阻止淋巴细胞分化，导致缺乏成熟 T 和 B 细胞。猪免疫系统发育和免疫应答发生机制与人类更为相似，是进行生物医学研究的有利工具，制备RAG2 KO免疫缺陷猪动物模型，研究其免疫特性，对进一步发掘免疫缺陷猪模型的应用意义重大。 本研究前期以云南省特有的滇南小耳猪为实验动物，通过CRISPR/Cas9基因编辑和体细胞核移植技术经过首轮克隆获得了RAG2 KO胎儿，以RAG2 KO胎儿建立RAG2 KO成纤维细胞系。本研究以RAG2 KO成纤维细胞为供体细胞，进行第二轮克隆获得RAG2 KO基因编辑猪，通过PCR和TA克隆鉴定其基因型。同时，通过胸腺和脾脏大体观察、HE染色和外周血单个核细胞（Peripheral blood mono-nuclear cell，PBMC），以及外周血白细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞数量检测，研究RAG2 KO对猪免疫器官及免疫细胞发育的影响，验证RAG2 KO猪的免疫缺陷表型。通过外科手术的方法，将重构胚移植到4头代孕母猪，在胚胎移植后的23d 、51d 和86 d 通过超声检测代孕母猪妊娠情况，4头代孕母猪中有2头怀孕，妊娠率为50%。妊娠116 d后，2头妊娠母猪顺利产下12头成活仔猪。采集12头仔猪的肌肉组织提取DNA，其基因型鉴定结果表明，12头基因编辑猪均为阳性，且基因型一致。与野生型（WT）滇南小耳猪相比，RAG2 KO猪的胸腺和脾脏尺寸显著变小。HE染色结果显示，WT猪的胸腺组织可见明显的生发中心和胸腺小体，RAG2 KO猪胸腺组织结构混乱，胸腺特征性结构胸腺小体不明显，未见明显生发中心。与WT相比，RAG2 KO猪脾脏组织结构混乱，脾脏红髓中的中央动脉管消失，边缘区过渡模糊，显示RAG2 KO导致了胸腺和脾脏的发育不良。血常规检测结果显示，RAG2 KO猪外周血中白细胞总数和淋巴细胞数显著下降（p＜0.05），嗜酸性粒细胞显著升高（p＜0.05），嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞数量无显著变化（p＞0.05），表明RAG2 KO可下调淋巴细胞数量。流式实验结果显示，与WT相比RAG2 KO猪成熟T、B淋巴细胞比例显著降低（p＜0.05）。综上所述，本研究成功获得 12头RAG2 KO仔猪，胸腺内无胸腺小体和生发中心，T、B细胞数量显著降低，脾脏红髓中的中央动脉管消失，边缘区过渡模糊，外周血淋巴细胞显著降低，表示RAG2 KO导致免疫器官和免疫细胞发育不良。以上结果成功验证了RAG2 KO猪的免疫缺陷表型，本研究可为免疫缺陷疾病的研究以及肿瘤模型和人源化动物的构建提供实验动物。 |
| 并列题名： | Construction of RAG2 Knockout Pigs and Immunodeficiency Verification eng |
| 题名主题： | RAG2 重症免疫缺陷 基因编辑 猪 学位论文 |
| 中图分类： | S813.3-533 |
| 个人名称等同： | 王锋冲 著 |
| 个人名称次要： | 魏红江 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240527 |