| 提要文摘： | - 利用SPR、BLI技术和荧光素酶报告基因检测栎樱酸与TNF-α、TNF-R1之间的相互作用。实验结果表明：栎樱酸与TNF-R1之间没有直接相互作用，但可以与TNF-α直接结合，亲和力（KD值）为7.066×10-6 M；栎樱酸能够干扰TNF-α与TNF-R1之间的相互作用，使得TNF-α和TNF-R1之间KD值从7.33×10−9 M下降至2.11×10−7 M；栎樱酸显著抑制TNF-α诱导的NF-κB转录活性。以上结果证明栎樱酸可以与TNF-α直接结合，阻断TNF-α与TNF- R1之间的相互作用，抑制其效应分子NF-κB的活化。
- MTT检测发现栎樱酸对24种肿瘤细胞活性均有抑制作用，其中HCT-116和HCT-15人结直肠癌细胞对栎樱酸最为敏感。蛋白免疫印迹和MTT检测发现TNF-R1在HCT-116和HCT-15细胞中高表达，TNF-α能促进HCT-116和HCT-15细胞增殖。对HCT-116和HCT-15细胞进行克隆形成实验、EdU细胞增殖检测、流式细胞术、蛋白免疫印迹检测发现栎樱酸能够显著抑制细胞克隆形成和DNA合成，诱导细胞G0/G1周期阻滞和细胞凋亡，抑制细胞中周期相关蛋白（Cyclin B1, Cyclin D1, Cyclin E1, c-Myc）和抗凋亡蛋白（Survivin, Bcl-2, Bcl-xL, XIAP, Mcl-1）表达，增加促凋亡蛋白（PARP, Caspase3, Caspase7, Caspase9）的活性。
- 为了进一步探究栎樱酸抑制结直肠癌的分子机制，我们利用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光检测栎樱酸对TNF-α刺激的HCT-116和HCT-15细胞中NF-κB信号通路的影响。实验结果表明栎樱酸不仅能显著抑制TNF-α刺激的IKKα/β, IκBα, p65的磷酸化水平和p65的核转位，还能抑制TNF-α刺激的抗凋亡蛋白（XIAP, Mcl-1, Survivin）和周期相关蛋白（Cyclin D1, c-Myc）的表达。此外，栎樱酸对TNF-α诱导的ERK1/2, AKT和STAT3的磷酸化水平也有一定抑制作用。以上研究表明在HCT-116和HCT-15细胞中栎樱酸能够抑制TNF-α诱导下游信号通路的活化，进而发挥其抗癌作用。
- 为了探究栎樱酸在体内的作用效果，我们以人结直肠癌异种移植裸鼠模型作为研究对象，按照5 mg/kg体重和10 mg/kg体重的给药剂量对裸鼠连续腹腔注射18天并监测肿瘤生长变化，给药结束后对肿瘤组织进行蛋白免疫印迹和免疫组化检测。实验结果表明栎樱酸能有效抑制人结直肠癌异种移植瘤的生长，显著降低肿瘤体积和重量，抑制肿瘤组织中p65的磷酸化水平，抑制Ki67及抗凋亡蛋白（Bcl-xL, XIAP, Cyclin D1）的表达，促进cleaved-Caspase3表达。以上结果表明在HCT-116和HCT-15人结直肠癌异种移植裸鼠模型中，栎樱酸能够阻断TNF-α关键效应分子NF-κB活化，抑制肿瘤的生长。
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