书目详细信息
： 铁皮石斛4个CESA/CSL基因的CRISPR/Cas9载体构建及功能的探究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 铁皮石斛4个CESA/CSL基因的CRISPR/Cas9载体构建及功能的探究/.兰晓天著/.和凤美指导 |
| 出版发行项： | 2019.6.3 |
| 载体形态项： | 60页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 纤维素是植物细胞壁的主要结构成分，纤维素合成酶超级基因家族对植物纤维素合成具有重要作用。铁皮石斛(Dendrobium officinale）是我国最珍贵的中药材之一，对很多疾病具有很好的疗效。减少铁皮石斛内部纤维和提高多糖含量是铁皮石斛育种的重要目标。在前期研究中，从铁皮石斛转录组中筛选到4个在茎干中高表达纤维素合成酶和类纤维素合成酶基因(DeCSL4、DeCSLD4、DeCSLD5、DeCESA5)，为了初步探究这4个基因的功能,为一步基因工程培育铁皮石斛新品种提供基础，本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了4个基因多靶点编辑载体，得到了适合铁皮石斛农杆菌介导的遗传转化条件，建立了铁皮石斛再生体系，获得突变植株。得到如下结论： 1、以DeCSL4、DeCSLD4、DeCSLD5、DeCESA5基因作为靶基因，利用在线软件CRISPR-P设计3个靶点序列，并采用Overlapping-PCR技术和Golden Gate cloning策略构建了DeCSL4、DeCSLD4、DeCSLD5、DeCESA5基因CRISPR/Cas9的多重sgRNA载体pYLCRISPR/Cas9，经PCR检测、酶切检测和测序验证，已成功构建4个基因编辑载体。 2、建立了适合铁皮石斛的农杆菌介导遗传转化体系，以农杆菌EHA105为侵染菌种，铁皮石斛原球茎为受体材料，从外植体的预培养时间、侵染浓度和侵染时间，共培养时间做了较全面的试验，得到了适宜的转化体系：以原球茎为受体材料，预培养时间为2-4天，侵染浓度为0.6-0.9（OD600），侵染时间为30min,共培养时间为3天时较为适宜铁皮石斛的农杆菌侵染。接种在含有450µl/mL的羧苄青霉素或350µl/mL的特美汀筛选培养基上培养45天。 3、通过农杆菌遗传转化，PCR验证和测序后，获得了DeCSL4、DeCSLD5，2个基因的突变植株。结果表明：DeCSL4突变植株在第二个靶位点上发生了一个G-A碱基的替换，在第二靶点与第三靶点之间发生了7个碱基缺失的非靶位点突变。通过对DeCSL4突变植株的纤维素含量测定发现突变植株茎干中的纤维素显著的少于对照植株。DeCSLD5的突变植株测序结果表明：在第一个靶位点上出现了一个碱基G的插入。与正常组培苗比较，相同时间相同培养条件下，正常植株分化成了含有根茎叶的完整植株，而突变苗保持类原球茎状态。 |
| 并列题名： | Construction of CRISPR/Cas9 Vector and Study on Function of Four Cellulose and Cellulose-like Synthase Genes in Dendrobium officinale |
| 题名主题： | CRISPR/Cas9 纤维素合成酶基因 类纤维素合成酶基因 铁皮石斛 功能 学位论文 |
| 中图分类： | S567.239-533 |
| 个人名称等同： | 兰晓天 著 |
| 个人名称次要： | 和凤美 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |