书目详细信息
： TNF-α小分子抑制剂的筛选及其改善类风湿关节炎的作用机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY40.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | TNF-α小分子抑制剂的筛选及其改善类风湿关节炎的作用机制研究/.陈飞著/.王宣军指导 |
| 出版发行项： | 2022.6.1 |
| 载体形态项： | 92页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 食品科学技术学院,学号2019110011 |
| 提要文摘： | 类风湿关节炎是一种慢性关节炎的系统性免疫疾病，其发病机理尚未明确。治疗类风湿关节炎的药物主要包括非甾体类抗炎药、糖皮质激素类药物和抗风湿药物。研究证实，体液免疫中的关键炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是类风湿关节炎的治疗靶点。抗TNF-α生物制剂对类风湿关节炎具有显著的临床效果。生物制剂治疗成本昂贵且易于产生过敏的副反应。因此，在胞外结合TNF-α并抑制其活性的小分子化合物更具有价值。国内外主要采用组合化合学、虚拟化合物库筛选得到TNF-α胞外抑制剂，如SPD304、UCB6876、C87等小分子化合物。但这些小分子化合物由于副作用大，导致其无法应用到临床。因此，来源于药食资源的天然化合物作为胞外结合TN-α并抑制其活性的小分子抑制剂的筛选更具有研究意义。 本文采用表面等离子共振（SPR）技术、L929细胞凋亡模型和293-NF-κB报告细胞，对天然化合物进行胞外结合TN-α并抑制其活性的小分子抑制剂的筛选。筛选得到，常常用于治疗风湿性疾病的骆驼蒿植物中的天然化合物3α-乙酰氧基-27-羟基-20(29)-羽扇烯-28-油酸甲酯（3-ACE）。3-ACE与TNF-α直接结合，并抑制TNF-α介导的L929细胞凋亡和NF-κB活性。选择3-ACE为TN-α小分子抑制剂的候选化合物，并探究其改善类风湿关节炎的作用机制。以L929细胞和293-NF-κB报告细胞为研究对象，采用TNF-α细胞毒性分析、荧光素酶报告基因分析，以及选择TNF-α的生物制剂adalimumab，探究3-ACE对TNF-α活性的影响。在分子互作水平上，利用SPR技术检测3-ACE对TNF-α与其受体结合的影响。选用成纤维样滑膜细胞HFLs和类风湿关节炎性成纤维样滑膜细胞MH7A为细胞模型，采用细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹等方法，探究3-ACE对TNF-α介导的NF-κB活化和P65核移位的影响。选用TNF-α转基因小鼠为类风湿关节炎模型，随机分为五组：对照组、模型组、5 mg/kg 3-ACE处理组、10 mg/kg 3-ACE处理组、1.5 mg/kg Adalimumab处理组。以腹腔注射方式，连续给药54天。采用H&E染色、甲苯胺蓝染色、番红O固绿染色、酶联免疫吸附等方法，探究3-ACE对TNF-α诱导的类风湿关节炎的影响。主要研究结果如下： （1）186个天然化合物中有26个化合物直接与TNF-α相互作用；21个化合物显著抑制TNF-α介导的L929细胞凋亡（p<0.05）；15个化合物显著抑制TNF-α介导的NF-κB活性（p<0.05）；选择与TNF-α直接结合，并抑制其活性的3-ACE为候选化合物。 （2）3-ACE以浓度依赖方式抑制TNF-α介导的L929细胞的凋亡（p<0.01或p<0.001）且对L929细胞无毒性作用；并且3-ACE显著抑制TNF-α介导的NF-κB活性（p<0.001）；当3-ACE的处理浓度为10 μM时，与0.01 μg/mL的adalimumab抑制TNF-α介导的NF-κB活性的作用相当。在分子互作水平上，3-ACE与TNF-α结合，不与其受体结合，并阻断其与受体的结合。 （3）在HFLs和MH7A细胞中， 3-ACE均能显著地抑制TNF-α介导P65的核移位（p<0.05或p<0.01）；当处理时间为5 min时，3-ACE均能显著地降低NF-κB活化的关键蛋白IKKα/β, IκBα, p65的磷酸化水平（p<0.05或p<0.01）。 （4）TNF-α转基因小鼠体重明显低于对照组；且四肢关节出现明显的肿胀现象、肾脏湿重和指数均显著降低、血清中IL-6和IL-1β的表达水平显著增加（p<0.05）； adalimumab处理组显著改善转基因小鼠四肢的关节肿胀、缓解指关节和踝关节的软骨损伤、降低血清中IL-6和IL-1β的表达水平（p<0.05）。而3-ACE的高、低剂量处理组，均能显著改善小鼠的四肢关节的肿胀和增加肾脏湿重和指数（p<0.05）；改善TNF-α转基因小鼠关节软骨的损伤，对关节组织有明显的改善作用；以及显著降低TNF-α转基因小鼠血清中IL-6和IL-1β的表达水平（p<0.05），对TNF-α转基因小鼠的炎症水平具有改善作用。 综上所述，本文筛选得到，在胞外结合TN-α并抑制其活性的小分子抑制剂3-ACE；同时证实了3-ACE抑制TNF-α生物活性的分子作用机制和具有改善TNF-α诱导的类风湿关节炎的作用。该研究结果，不仅为TNF-α小分子抑制剂的筛选提供了研究基础；而且为3-ACE作为TNF-α小分子抑制治疗类风湿关节炎提供了科学依据。 |
| 并列题名： | Screening of Small-molecule TNF-α Inhibitors and the Mechanism of Improving Rheumatoid Arthritis eng |
| 题名主题： | 类风湿关节炎 TNF-α 3-ACE 成纤维样滑膜细胞 TNF-α转基因小鼠 学位论文 |
| 中图分类： | R593.22-533 |
| 个人名称等同： | 陈飞 著 |
| 个人名称次要： | 王宣军 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20230522 |