书目详细信息
： 口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用/.张国春著/.邹丰才指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.24 |
| 载体形态项： | 66页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240431 |
| 提要文摘： | 口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus, FMDV）引起的，在牛、骆驼、绵羊、猪等70多种野生动物中传染性极强的人兽共患病。FMD被世界动物卫生组织（World Organization for Animal Health,WOAH）列为必须通报的动物疾病之一，也是我国的一类动物传染病，被《国家中长期动物疫病防治规划（2021—2025年）》列为优先防治和重点防范的动物疫病。FMDV有A、O、C、Asia I、SAT I、SAT Ⅱ和SAT Ⅲ共7个血清型及80多个亚型，各型之间无交叉保护反应。全球大部分地区均暴发过FMD，其中以血清型FMDV-O流行最为广泛。我国FMD的疫情主要涉及Asia I型、FMDV-A和FMDV-O，以FMDV-O和FMDV-A较为常见，FMDV-O几乎每年都有报道。为此，研制一种标准化的FMDV-O阻断酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,?ELISA）抗体检测方法对防治FMDV-O流行意义重大。 本研究对FMDV-O阴性血清和阳性血清标准品进行制备，利用自制的血清标准品作为阴性对照和阳性对照，FMDV-O灭活病毒作为抗原，单克隆抗体（mAb）?7E3作为阻断抗体，结合方阵滴定法，对ELISA反应条件进行优化，建立了一种检测FMDV-O的抗体检测方法。本实验探寻的最佳包被条件为：使用pH 9.6碳酸盐缓冲液将抗原浓度稀释至48.4 μg/mL，4?℃包被过夜，50?μL/孔；最佳封闭液（1?%?BSA、2.5?%?BSA、5?%?BSA、PBST、1?%?牛血清和未加封闭液）和最优反应时间为1?%的牛血清，3 ℃封闭1 h；采用PBST为最佳样品稀释液；最佳待检血清稀释度为1:4，37?℃反应1 h；最佳单抗的稀释度为32.8 μg/mL，37?℃反应45?min；最佳IgG-HRP羊抗鼠二抗稀释度为1 μg/mL，37?℃反应45?min；最佳底物（TMB）显色时间为37 ℃避光显色15 min；加入终止液，50?μL/孔；酶标仪OD450nm读数，计算PI值。通过对88份阳性血清进行阻断ELISA检测得出判定标准为：血清阻断率＜57?%判为阴性，血清阻断率≥57?%判为阳性。 特异性试验结果显示，本研究建立的ELISA方法能与FMDV-O阳性血清进行特异性反应，而与水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV），口蹄疫亚洲I型病毒（Foot and Mouth Disease virus type Asia I, FMDV-Asia I），羊痘病毒（Sheep pox virus, SPV），口蹄疫A型病毒（Foot and mouth disease virus type A, FMDV-A），蓝舌病毒（Bluetongue virus, BTV），小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus, PPRV），赤羽病毒（Akabane virus, AKV）的阳性血清无交叉反应。重复性试验结果显示，批间和批内重复性试验的变异系数均小于10?%。使用本方法和FMDV-O阻断ELISA抗体检测试剂盒同时检测160份牛血清样品，比较试验结果表明，本研究建立的阻断ELISA方法敏感性和特异性分别为88.9?%和100 %，与FMDV-O阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为93.75?%，临床检测血清样本（牛450份和羊450份）阳性率分别为5.8?%和4.4?%，证明本方法作为FMDV-O阻断ELISA抗体检测的代替产品有良好的应用前景。 综上所述，本试验建立的FMDV-O阻断ELISA抗体方法具有特异、稳定、灵敏的优点，能够有效对牛和羊体内FMDV-O抗体水平进行监测，为我国FMD流行监测及防控提供技术支持，为进一步建立标准化的检测试剂盒提供参考。 |
| 并列题名： | Establishment and preliminary application of an ELISA method for detecting foot-and-mouth disease virus type O blocking antibodies eng |
| 题名主题： | 口蹄疫FMDV-O 血清标准物质 阻断ELISA 抗体方法 学位论文 |
| 中图分类： | S855.3-533 |
| 个人名称等同： | 张国春 著 |
| 个人名称次要： | 邹丰才 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240529 |