书目详细信息
： 石林奶山羊产气荚膜梭菌毒型鉴定及分子流行病学调查
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 石林奶山羊产气荚膜梭菌毒型鉴定及分子流行病学调查/.申宏利著/.段纲，常华指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.8 |
| 载体形态项： | 66页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210425 |
| 提要文摘： | 产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原微生物，一定条件下可引起人和动物的多种疾病。不同毒型产气荚膜梭菌严重影响畜禽的健康养殖，给养殖业造成重大经济损失，同时也对人类健康造成极大威胁。本实验拟调查昆明石林地区导致奶山羊腹泻中产气荚膜梭菌毒素型分布、耐药性和遗传进化流行情况，为后期该病的诊断及防制奠定基础。
2. 产气荚膜梭菌不同毒素型多重 PCR 方法的建立 根据GenBank中α、β、ε、ι四种毒素建立五重 PCR，并鉴定分离株的毒型。最佳扩增体系（50ul体系）为：25ul PCRmix，上下游引物四对（α、β、ε、ι）0. 1 umol/L 各1ul，模板2ul，ddH2O 15ul。最佳扩增条件为：95℃，5min ；95℃，30s；61.2℃，30s；72℃，1 min；共30个循环，72℃，10 min。特异性试验表明，该方法对 A 型、B 型、C 型产气荚膜梭菌标准菌株、D 型分离株和 A+iota克隆菌及B型＋iota克隆菌均扩增出相应的目的条带，而沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均扩增不到任何条带，特异性较好；灵敏性试验表明，该方法对 A 型、B 型、C 型、D 型标准菌株和 A+iota克隆菌及B型＋iota克隆菌基因组 DNA 最低检测量分别为 0.27ng/ul、1ng/ul、82pg/ul、0.42ng/ul、0.1ng/ul、10ng/ul，灵敏性好；重复性试验表明该方法有很好的重复性。应用所建立的多重PCR方法从 20 份羊临床病料中检测到 9 株 A型和 11 株 D 型产气荚膜梭菌。 3.产气荚膜梭菌全基因组分析及16s rRNA进化树分析 挑选分离株中的A型和D 型株采用 llumina进行全基因组测序，通过Trimmomatic软件包进行质量过滤，过滤后的reads用于后续分析。使用Spades 软件对过滤后reads进行组装。D型序列中含有174信号肽蛋白，分泌蛋白有89个，有907个跨膜蛋白。预测含有抗性基因为cepA基因、tetB(P)基因、tetA(P)和MprF；该菌的毒力基因包括bfmR基因、phoR基因、wcbQ基因、MucD前体。A型菌结果显示含有175信号肽蛋白，分泌蛋白有88个，有865个跨膜蛋白。预测抗性基因有tetB(P)基因、tetA(P) 基因和MprF基因，该菌的毒力基因包括Colibactin基因、fbpC) iron(III基因、胆碱结合蛋白E、fsrA基因。16s rRNA进化树分析A型分离株X12与S11、S8同源性高达100% 同源关系最近。D型分离株X18与SJC-5同源性最高97%,同源关系最近。 本研究为奶山羊产气荚膜梭菌的分离、快速诊断及防治提供重要数据支撑。 |
| 并列题名： | Clostridium perfringens identification and Molecular epidemiology investigation of Shilin milk goat |
| 题名主题： | 奶山羊 产气荚膜梭菌 耐药性 多重PCR 学位论文 |
| 中图分类： | S827-533 |
| 个人名称等同： | 申宏利 著 |
| 个人名称次要： | 段纲 指导 |
| 个人名称次要： | 常华 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |