书目详细信息
： 猫UC-MSCs的分离、鉴定及向神经干细胞的诱导分化
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 猫UC-MSCs的分离、鉴定及向神经干细胞的诱导分化/.严涵著/.严玉霖指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.26 |
| 载体形态项： | 60页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210403 |
| 提要文摘： | 目的：猫脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）是一种具有自我更新和多向分化能力的成体干细胞，存在于脐带华通氏胶（wharton’s jelly，WJ）组织中。尽管UC-MSCs已被广泛应用于治疗神经系统疾病，但仍缺乏简单有效的方法将其诱导为神经干细胞（Neural stem cells,NSCs），本研究旨在研究通过分离、鉴定和培养猫UC-MSCs，建立最优的体外培养条件，进而诱导UC-MSCs分化为NSCs，为临床应用奠定理论基础。 方法：（1）通过组织块培养法和Ⅱ型胶原酶消化法从健康足月剖腹产新生幼猫脐带中分离原代细胞，在体外盲传至第3代、第4代、第5代、第6代后应用流式细胞术鉴定细胞表面标记物。（2）将第3代UC-MSCs分别进行成骨、成脂、成软骨诱导分化，对诱导结果分别进行茜素红、油红、阿利辛蓝染色，鉴定UC-MSCs。（3）CCK-8法绘制不同代次UC-MSCs细胞生长曲线。（4）通过RT-PCR检测不同代次UC-MSCs干性基因SOX2、OCT-4和Nanog的相对表达量。（5）通过神经干细胞培养基（20mg/mL EGF+20mg/mL bFGF+1% B2+2% N27+DMEM/F12）将UC-MSCs诱导分化为NSCs，将第3代、第4代、第5代、第6代的NSCs应用流式细胞术鉴定细胞表面标记物。（6）CCK-8法绘制不同代次NSCs细胞生长曲线。（7）通过RT-PCR检测不同代次NSCs干性基因Nestin、NSE、GFAP的相对表达量。 结果：（1）组织块培养法和Ⅱ型胶原酶消化法成功分离得到猫UC-MSCs，流式细胞术检测不同代次UC-MSCs细胞表面标记物，结果显示第3代、第4代、第5代、第6代细胞CD44、CD90、CD105呈阳性表达，CD34呈阴性表达；第3代UC-MSCs成骨、成脂、成软骨诱导成功，以上结果符合MSCs的特征。（2）CCK-8法绘制细胞生长曲线结果显示UC-MSCs第2d进入对数生长期。（3）与P1代UC-MSCs相比，P2代UC-MSCs干性基因SOX2 相对表达量极显著高于P1、P3、P4、P5、P6（P＜0.01），P6代UC-MSCs干性基因SOX2 相对表达量极显著高于P1、P3、P4、P5（P＜0.01）；P3代UC-MSCs干性基因OCT-4相对表达量极显著高于P1、P2、P4、P5、P6（P＜0.01），P4极显著高于P1、P2、P5、P6（P＜0.01），P5显著高于P1、P2、P6（P＜0.05）；P3代UC-MSCs干性基因Nanog相对表达量显著高于P1、P2、P5、P6（P＜0.05），P4极显著高于P1、P2、P3、P5、P6（P＜0.01）。（4）与诱导前不同代次猫UC-MSCs细胞表面标记物相比，流式细胞术检测不同代次的猫UC-MSCs诱导为NSCs后细胞表面分子CD44、CD90和CD105阳性表达率显著下降（P＜0.01），CCK-8法绘制细胞生长曲线结果显示NSCs第4d进入对数生长期。（5）不同代次UC-MSCs诱导为NSC后，在不同代次NSCs中，Nestin基因的相对表达量呈现逐渐降低的趋势，其中P3代NSCs极显著高于P4、P5、P6代NSCs（P＜0.01）；在不同代次NSCs中，NSE基因的相对表达量呈现先降低后升高的趋势，其中P3代NSCs显著高于P4代(P＜0.05)，极显著高于P5代(P＜0.01)，P4代NSCs显著高于P5代(P＜0.05)，P6代NSCs极显著高于P5代(P＜0.01)；在不同代次NSCs中，GFAP基因的相对表达量相对稳定，其中P3代NSCs显著高于P6（P＜0.05）。 结论：（1）通过组织块培养法和Ⅱ型胶原酶消化法可在体外分离得到猫UC-MSCs，添加10%FBS的DMEM/F12培养基可实现体外增殖，猫UC-MSC具有成骨、成脂、成软骨分化的潜能，猫UC-MSC第3d进入对数生长期，随着传代培养的进行，UC-MSCs的多能性发生了变化。（2）通过神经干细胞培养基(20mg/mL EGF+20mg/mL bFGF+1% B2+2% N27+DMEM/F12)可将猫UC-MSCs诱导分化为NSCs。 |
| 并列题名： | Isolation, identification and induced differentiation of cat UC-MSCs into neural stem cells eng |
| 题名主题： | 猫脐带间充充质干细胞 神经干细胞 分离 培养 诱导 学位论文 |
| 中图分类： | S852.21-533 |
| 个人名称等同： | 严涵 著 |
| 个人名称次要： | 严玉霖 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240516 |