书目详细信息
： 猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查及SD株感染性克隆的构建
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查及SD株感染性克隆的构建/.邓紫艳著/.段纲,李晓成指导 |
| 出版发行项： | 2019.5.29 |
| 载体形态项： | 65页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus, PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，给我国养猪业造成了重大经济损失。PRRSV流行广且毒株易发生变异，给该病防控带来巨大挑战。为了解我国PRRSV流行毒株的遗传变异情况，同时对流行毒株进一步探索。本研究对2017-2018年我国部分地区PRRS的流行情况进行调查和分析，完成了流行毒株的分离及感染性克隆的构建，以期为研制PRRS新型疫苗提供科学依据。 利用RT-PCR方法检测了2017-2018年收集自我国26个省份2519份临床疑似PRRS发病样品，并扩增病毒ORF5基因进行测序和遗传变异分析，结果表明，PRRSV的抗原阳性率为45.4%（1167/2519）。测序的68株PRRSV ORF5基因序列与GenBank上的21株PRRSV ORF5参考序列的核苷酸同源性为78.5%-100%，氨基酸同源性为78.3%-100%。遗传演化分析表明近两年PRRSV以类NADC30毒株的流行为主，占比为60.29%（41/68）。 利用MARC-145细胞对PRRSV阳性病料进行病毒分离，选择SD株在细胞上继续传代培养，全基因组序列测定和遗传演化分析。结果表明，该毒株能在MARC-145细胞产生明显病变，PCR鉴定和间接免疫荧光试验证实为PRRSV。全基因组测序显示，该毒株基因组全长15010bp，在Nsp2高变区aa322-aa432、aa483和aa504-aa522存在131个氨基酸不连续缺失，与我国的类NADC30毒株和美国NADC30毒株存在相同缺失特点，同时SD株在aa584-aa585存在2个氨基酸缺失。遗传演化和同源性分析结果表明，SD株与美国NADC30毒株和中国类NADC30毒株同属于一个亚群，与美国NADC30毒株同源性最高，为93.1%。对分离毒株第10代测定病毒TCID50，病毒滴度达106.23TCID50/0.1ml，将该分离毒株命名为SD株。 基于SD株全基因组序列设计引物，全长共分5段进行RT-PCR扩增。同时利用同义突变引物引入酶切位点，最终将所有片段依次连接到pWSK-CMV载体上，构建全长质粒pWSK29-SD。pWSK29-SD转染MARC-145细胞观察细胞病变情况，结果显示，转染MARC-145细胞能产生与亲本病毒感染相同的细胞病变。RT-PCR检测和测序、间接免疫荧光试验和生长曲线表明，拯救病毒存在遗传标记，在MARC-145细胞上呈现出特异性荧光染色，和亲本毒株两者的病毒滴度在48h达到顶点，但病毒滴度低于亲本毒株。由此表明，构建的pWSK29-SD的全长cDNA具有感染性，该毒株被成功拯救。 综上所述，本研究完成了2017-2018年我国PRRS的流行病学调查，分离到了PRRS流行毒株SD株，成功构建了SD株的感染性cDNA克隆，并拯救出病毒，为我国部分地区PRRS的防控提供数据支撑，同时为PRRSV的致病机制和新型疫苗的研制奠定了平台基础，具有重要公共卫生意义。 |
| 并列题名： | Epidemiological Investigation of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome and Construction of strain SD Infectious Clone |
| 题名主题： | 猪繁殖与呼吸综合征 流行病学调查 遗传变异分析 病毒拯救 类NADC30毒株 学位论文 |
| 中图分类： | S852.65-533 |
| 个人名称等同： | 邓紫艳 著 |
| 个人名称次要： | 段纲 指导 |
| 个人名称次要： | 李晓成 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |