书目详细信息
： 紧密连接跨膜蛋白claudin-1在猪瘟病毒感染过程中的作用研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 紧密连接跨膜蛋白claudin-1在猪瘟病毒感染过程中的作用研究/.杨晓颖著/.孙永科指导 |
| 出版发行项： | 2019.5.29 |
| 载体形态项： | 55页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 猪瘟（CSF）是世界范围内最重要的跨国界猪病毒性疾病之一，其病原体为黄病毒科中瘟病毒属的重要成员猪瘟病毒（CSFV）。claudin-1作为一种紧密连接跨膜蛋白，在多种病毒（尤其是黄病毒科成员）入侵、感染宿主细胞过程中发挥重要作用。然而，在同为黄病毒科重要成员CSFV入侵宿主过程中，claudin-1是否也扮演重要角色目前尚无报道。本研究以体外细胞培养系统为模型，运用RT-qPCR、western blot等实验方法评价CSFV在感染宿主细胞的过程中是否和claudin-1蛋白具有相关性；对设计特异针对claudin-1基因的2条siRNA序列和1条用作阴性对照的随机序列进行有效性验证；在此基础上，利用siRNA干扰技术，分别从基因水平和蛋白水平研究下调claudin-1表达对CSFV在宿主细胞增殖的影响。本研究旨在探讨claudin-1在CSFV入侵、增殖以及致病中的作用。 （1）CSFV入侵宿主细胞过程中与claudin-1蛋白相关性分析 将CSFV接种PK-15细胞，接毒后的不同时间点收取细胞样品进行检测。RT-qPCR结果显示：与不接毒的空白对照组相比，接种CSFV的PK-15细胞claudin-1基因mRNA表达水平显著下调（P<0.05）；western blot结果显示：在接种病毒后的所有检测时间段，细胞claudin-1蛋白表达均明显下调。提示CSFV感染可下调细胞claudin-1表达。 （2）特异针对claudin-1的siRNA序列有效性验证 使用RNAi ExplorerTM 软件设计相关的siRNA序列，分别利用RT-qPCR和western blot方法验证所设计序列的有效性。结果显示：在转染24 h后，两条针对claudin-1的siRNA序列均能有效抑制claudin-1的表达，抑制效果可持续至转染后60 h以上。 （3）特异性siRNA knockdown claudin-1基因对CSFV增殖的影响 将针对claudin-1基因的siRNA转染至PK-15细胞，于转染后24h接种CSFV，接毒后的不同时间点收取细胞样品，分别采用RT-qPCR和western blot检测claudin-1、CSFV基因mRNA及蛋白的表达，IFA检测CSFV蛋白的表达。RT-qPCR结果显示：通过siRNA knockdown claudin-1，CSFV基因mRNA表达水平较接毒对照组显著上调（P<0.05）；同时，western blot和IFA结果显示：CSFV蛋白表达水平相对接毒对照组也明显上调。表明knockdown claudin-1可显著影响CSFV的增殖。 总之，研究结果通过体外细胞实验首次证明了CSFV的感染可负反馈调控细胞claudin-1表达。该研究为CSFV突破细胞屏障、入侵宿主细胞的作用机制研究提供了一定的理论补充。 |
| 并列题名： | Study on the role of tight junction transmembrane protein claudin-1 in Classical Swine Fever Virus infection |
| 题名主题： | 猪瘟病毒 claudin-1 PK-15细胞 感染 增殖 学位论文 |
| 中图分类： | S852.4-533 |
| 个人名称等同： | 杨晓颖 著 |
| 个人名称次要： | 孙永科 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |