书目详细信息
： ALV-J亚型云南YN2021株感染性克隆的构建
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | ALV-J亚型云南YN2021株感染性克隆的构建/.王国君著/.李文贵，信爱国指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 73页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2020210413 |
| 提要文摘： | J亚型禽白血病病毒（Avian Leukosis virus subgroup J, ALV-J）属反转录病毒科（Retravirid）、α反转录病毒属（alpharetrovirus）的RNA病毒。自1999年在中国首次ALV-J以来，相关报道便持续出现，且分离自不同品种鸡的ALV-J的env基因和LTR区域均有明显的差异，云南地方鸡种资源十分丰富，在国家有关政策扶持下，盐津乌骨鸡是云南六大名鸡中的一种，也是盐津县一项重要的经济支柱。目前还没有关于云南盐津乌骨鸡 ALV 感染情况的报道，为了解某盐津乌骨鸡育种场ALV的感染情况，本研究通过对某盐津乌骨鸡场样品进行检测，确定其主要流行亚型，掌握鸡场ALV感染情况探究及ALV-J的基因特点。另外，ALV RNA聚合酶缺少校正机制，传代时容易出现突变，进而形成遗传变异的毒株。因此，很有必要通过反向遗传技术构建感染性克隆拯救病毒，获得单一起源且基因组结构清晰的ALV-J，为研究该病毒奠定基础。 对盐津乌骨鸡育种场ALV感染情况调查结果显示，ALV p27抗原阳性率为16.66%，对部分阳性样品亚型鉴定显示，主要为ALV-J，其次为ALV-B，存在ALV-J和ALV-B的混合感染，未发现其余亚型，表明该场以ALV-J亚型感染为主。研究测定了一株 ALV-J（YN2021）的全基因组序列（登录号为OP311315），并进行序列分析，结果显示基因组全长7 618 bp，与参考毒株核苷酸同源性65.0%～97.1%。该毒株env基因N-端糖基化位点与参考毒株存在差异；gp85有4个氨基酸缺失，3′UTR中的rTM仅存6 bp，DR1缺失3 bp，E元件有13 bp的插入；5′LTR长325 bp，其中U5和R较保守，U3存在突变，导致CAAT Box和PRE Box缺失。分离株YN2021 env基因与GX17NN05株同源性最高，而5′LTR与GD13HY株同源性最高，提示该分离株可能由广东省和广西省ALV重组产生。测定YN2021株TCID50为10-3.88/0.1mL，人工感染1日龄SPF鸡，自由采食饲养30周，观察临床症状，每间隔两周采血，分离血浆和血清，并称量体重。结果显示攻毒组性成熟迟缓，产蛋数下降，体重差异显著（p<0.05），血浆病毒载量和血清抗体水平呈规律性变化，致死率为50%，致肿瘤率为80%。以YN2021为亲本毒，将其前病毒DNA构建至pOK12R载体，再通过点突变重叠PCR对病毒基因组影响进行同义突变（C-A），去除EcoRⅤ，构建含分子标记的YN2021前病毒全基因组感染性克隆pOK12R-rYN2021。将pOK12R-rYN2021重组质粒转染DF-1细胞，盲传三代通过ELISA、PCR和IFA鉴定显示病毒拯救成功，并命名为rYN2021。通过TCID50测定、毒复制动力学和生长曲线的绘制，显示拯救病毒rYN2021的生物学特性与亲本病毒YN2021相同，且分子遗传标记能够稳定遗传。 |
| 并列题名： | The Construction of infectious clones of subtype J ALV Yunnan YN2021 strain |
| 题名主题： | 禽白血病病毒J亚型 遗传进化分析 致病性 感染性克隆 学位论文 |
| 中图分类： | S855.3-533 |
| 个人名称等同： | 王国君 著 |
| 个人名称次要： | 李文贵 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |