书目详细信息
： 一种滇重楼负链病毒（YPNSV）的cDNA全长侵染性克隆构建及致病性检测
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 一种滇重楼负链病毒（YPNSV）的cDNA全长侵染性克隆构建及致病性检测/.高丽珂著/.赵明富指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.29 |
| 载体形态项： | 65页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 植物保护学院, 学号2020210284 |
| 提要文摘： | 滇重楼（Paris polyphylla var. yunnanensis）是黑药花科（Melanthiaceae）重楼属（Paris）多年生草本植物，广泛种植于我国西南地区，其根状茎入药，是一种珍贵的道地药材。对云南地区滇重楼病害调查研究发现，滇重楼病毒性病害发生日益严重。本研究采用高通量测序技术（HTS）对表现出褪绿和花叶症状的滇重楼进行检测，根据测序结果设计特异性引物进行RT-PCR检测，RACE扩增并克隆病毒完整基因组，通过BLAST分析和系统发育分析确定其分类地位。通过构建农杆菌介导的病毒cDNA全长侵染性克隆，插入外源表达基因GFP，浸润注射接种指示植物，通过观察GFP绿色荧光表达情况、症状表现及RT-PCR鉴定进行致病性检测，并对云南昆明、曲靖和玉溪地区滇重楼其病毒感染情况进行田间调查及采样进行RT-PCR检测，所得主要研究结果如下： （1）本研究鉴定到一种新病毒，暂命名为白纤细病毒科（Phenuiviridae）Coguvirus属的滇重楼负链病毒（Yunnan paris negative-stranded virus，YPNSV）。YPNSV是分节段负链RNA病毒，YPNSV基因组由两条RNA片段组成。RNA1由6,616个核苷酸组成，包含一个开放阅读框（ORF），在反义链上编码一个2,181个氨基酸的蛋白，分子量250.97 kDa（p251）。通过BLASTx比对分析p251与西瓜皱叶相关病毒2（WCLaV-2）的依赖RNA的RNA聚合酶RdRp蛋白具有最高的氨基酸序列相似性，即69.82%。RNA2是双义编码，由2,864个核苷酸组成，ORF2a编码46.20 KDa（p46）的运动蛋白MP；ORF2b编码一个 38.68 kDa（p39）的核衣壳蛋白NP。P46与WCLaV-2编码的MP具有最高氨基酸序列相似性，达50.4%；p39与WCLaV-2的NP具有最高的氨基酸相似性，达60.9%，WCLAV-2的核心NPS与YPNSV的aa序列相似性最高，为62.0%。通过构建基于YPNSV和Bunyavirales目其它成员的RdRp和NP氨基酸序列的系统发育树，结果显示YPNSV与Coguvirus属成员聚为一簇，与WCLaV-2密切相关。基于以上结果，YPNSV被认为是白纤细病毒科（Phenuiviridae）Coguvirus属的一个新成员。 （2）本研究以载体pBWA（V）HS-35S为骨架进行EcorV酶切，将YPNSV的全长基因组序列克隆到载体上，并插入外源表达基因GFP，成功构建了其全长cDNA侵染性克隆pBWA（V）HS-35S-YPNSV-GFP。将pBWA（V）HS-35S-YPNSV-GFP分别转入GV3101和EHA105两种农杆菌内，通过浸润注射的方法接种滇重楼、心叶烟、本氏烟和苋色藜。结果显示，在接种10-15 d时，植株叶片开始显症，出现明显褪绿症状，观察GFP可看到明显的绿色荧光；在接种第30 d，植株叶片褪绿症状加重，叶片出现皱缩。经RT-PCR检测和病症观察统计，四种植物均鉴定到了YPNSV，植株发病率达95%以上，表明侵染性克隆pBWA（V）HS-35S-YPNSV-GFP具有侵染活性。 （3）为明确YPNSV在云南滇重楼种植区田间感染情况，本研究于2021年6月至11月从云南昆明、曲靖和玉溪三个地区共采集81份疑似病毒病症状的滇重楼样品，通过RT-PCR检测，结果显示，共有5份样品检测到YPNSV，总检出率为6.17%。在昆明地区样品中检测出3份样品含有YPNSV，检出率为11.11%；曲靖地区样品中没有检测到YPNSV；在玉溪地区样品中检测到2份样品含有YPNSV，检出率为6.45%。统计表明，不同地区样品中YPNSV的检出率差距较大，昆明样品中YPNSV检出率最高。 |
| 并列题名： | Construction of full-length cDNA infectious clone of a Yunnan paris negative-stranded virus（YPNSV）and pathogenicity detection |
| 题名主题： | 滇重楼负链病毒 农杆菌侵染性克隆 病毒表达载体 分子鉴定 学位论文 |
| 中图分类： | S435.672-533 |
| 个人名称等同： | 高丽珂 著 |
| 个人名称次要： | 赵明富 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |