书目详细信息
： 一种产脂肪酶乳酸菌饲料添加剂的前期开发
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 一种产脂肪酶乳酸菌饲料添加剂的前期开发/.吴丹著/.贾俊静, 韩宁指导 |
| 出版发行项： | 2019.06.04 |
| 载体形态项： | 52页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）是一类公认为安全的食品级微生物。它被广泛应用于工业生产，生物医药，畜牧养殖和食品发酵等。微生态制剂是益生菌活菌制剂，能改善宿主微生态平衡，提高宿主的健康水平。 本实验利用基因工程法构构建一株能过量产脂肪酶的乳酸杆菌工程菌HX1/pMG36e-lipase-nisI。该菌不含有抗生素等选择标记，符合食品安全规范。首先本实验从植物乳酸杆菌HX1基因组为模板扩增脂肪酶基因（lipase），在质粒pET30a中插入该脂肪酶基因（lipase），构建出大肠杆菌表达载体pET30a-lipase，将该表达载体用化转法转入BL21(E.coli BL21)，让脂肪酶基因（lipase）在大肠中的异源表达，以研究该脂肪酶酶学性质，结果表明，pH=8时，重组酶活力达到最高，达到了96.73U/mL，40℃时，重组酶活力达到最高，能达到110.01U/mL。该酶具有很强稳定性，甚至在pH=2时，脂肪酶活力依旧高于38.69U/mL，酶活力保持在40%以上，即使在温度在60℃时，脂肪酶活力还能保持在40%以上达到20.50U/mL。 之后将该脂肪酶基因（lipase）插入到表达载体pMG36e中，构建出植物乳酸杆菌表达载体pMG36e-lipase，再以先前购进的含有乳链菌肽抗性（nisI）基因的质粒pET30a为模板扩增nisI，在质粒pMG36e-lipase中成功插入该基因，替换其红霉素标记，成功构建乳酸菌表达载体pMG36e-lipase-nisI，将其用电转化法转化到植物乳酸杆菌HX1中，成功构建菌株HX1/pMG36e-lipase-nisI，测定其在Nisin中的抗性压力，结果表明该重组质粒在乳酸菌中具有良好的稳定性。通过对甘油三酯的水解产物甘油的定量，能发现该重组酶能够过量表达脂肪酶基因，相同条件下在含有甘油三酯的培养基中按照10%的添加量添加菌株，培养4小时，重组菌的脂肪酶表达效果是能达到菌表达量三倍以上。 本论文构建的以乳链菌肽（nisI）基因为筛选标记，脂肪酶基因（lipase）为表达基因的乳酸菌为之后将其应用于动物饲料添加剂奠定了工作基础，它在一定程度上可解决现有饲用脂肪酶的耐酸碱性不好和稳定性不高的问题；在经济价值上，解决现有饲用脂肪酶活性低，成本高的问题。为实现乳酸菌的体内定植以及食品级乳酸菌产品的开发奠定基础。 |
| 并列题名： | Preliminary Development of a Feed Additive for Lactic Acid Bacteria Producing Lipase |
| 题名主题： | 乳酸菌 nisI 脂肪酶 电转化 pMG36e载体 学位论文 |
| 中图分类： | S816.7-533 |
| 个人名称等同： | 吴丹 著 |
| 个人名称次要： | 贾俊静 指导 |
| 个人名称次要： | 韩宁 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200325 |