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： 几种根茎类作物Potyviridae科病毒检测技术、种类鉴定及分子变异研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 几种根茎类作物Potyviridae科病毒检测技术、种类鉴定及分子变异研究/.兰平秀著/.李凡, 李如慧指导 |
| 出版发行项： | 2017.04.12 |
| 载体形态项： | 145页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | ;甘薯、山药和重楼是以收获根茎为主要目的粮食、经济作物。云南地处西南边陲，光能资源充足，气候类型多样，甘薯、山药和重楼种植面积大、分布范围广，是我省重要的经济作物。然而，此类作物营养繁殖或生长期过长等原因，生长过程中容易遭受病毒的侵染，导致种性下降、产量和质量降低，引起严重的经济损失。本文以侵染甘薯、山药和重楼的马铃薯Y病毒科（Potyvirudae）几种病毒为研究对象，通过对甘薯G病毒（Sweet potato virus G，SPVG）、甘薯潜隐病毒（Sweet potato latent virus, SPLV）和甘薯轻斑驳病毒（Sweet potato mild mottle virus, SPMMV），以及侵染山药和重楼的马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒的鉴定研究，旨在为SPVG、SPLV和SPMMV提供灵敏、特异和快速的检测手段，探明侵染云南山药和重楼的马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒种类和分子变异。研究结果将为甘薯、山药和重楼无毒种苗筛选以及几种Potyviridae科病毒的诊断和防控提供科学的检测技术和理论依据，对云南省甘薯、山药和重楼的产业发展起到一定的促进作用。主要结果如下：1、根据SPVG、SPLV和SPMMV的保守区域设计引物和探针，建立同时检测SPVG、SPLV和SPMMV的多重RT-PCR和实时荧光多重RT-PCR检测体系，并分别将植物18s rRNA和植物细胞色素氧化酶基因(COX)作为内参纳入多重RT-PCR和实时荧光多重RT-PCR的体系构建，避免了因模板核酸质量差导致的假阴性结果。优化后的多重RT-PCR对目标基因的检测灵敏度为：SPVG和SPLV为10-2核酸模板稀释倍数，SPMMV和18s rRNA为10-3核酸模板稀释倍数；实时荧光多重RT-PCR对目标基因的检测灵敏度为：SPVG为10-6核酸模板稀释倍数，SPLV、SPMMV和COX为10-7核酸模板稀释倍数。以单一引物条件下的RT-PCR和实时荧光RT-PCR为对照，利用来自云南、山东、四川、西藏和安徽的74个田间甘薯样品，对多重RT-PCR和实时荧光多重RT-PCR的特异性进行验证。结果发现实时荧光多重RT-PCR对SPVG和SPLV的检测更准确、灵敏和特异，从74个样品中检测到SPVG感染样品64个，检出率为86.5%； SPLV侵染样品51个，检测率为68.9%；同时检出SPVG和SPLV的样品43个，复合侵染率达58.1%。利用本文所建立的方法都没有从来自中国的74个甘薯样品中检测到SPMMV，推测SPMMV在中国的发生不普遍。利用SPVG和SPLV的特异性引物，对实时荧光多重RT-PCR检测为阳性的田间甘薯样品进行RT-PCR验证、测序和系统进化树构建，结果本研究获得的SPVG和SPLV分离物分别分散在不同的基因簇，证明本研究建立的实时荧光多重RT-PCR对SPVG和SPLV的检测灵敏、特异和准确。2、利用Potyvirus属病毒的通用引物结合YMMV的特异引物，对2011-2012年采自开远、永胜、建水、澄江、宾川和砚山的73个山药样品进行RT-PCR，共检测到YMMV侵染样品31个，病毒检出率为16.7%-100%，平均检出率为42.5%，说明YMMV在云南的发生比较普遍。选择其中19个分离物cp基因核心区域765 nt的序列进行分析，显示了相互间82.0%-88.8%核苷酸序列一致性。利用基因组步移法，对变异较大的YMMV CN 1和YMMV CN 20进行全基因组序列扩增，获取YMMV CN 1 （KC407674）和YMMV CN 20（KC473517）分别9527 nt和9529 nt的基因组全序列，序列分析显示了相互间87.1%的核苷酸序列一致性，93.7%的氨基酸序列一致性，以及与YMMV其他分离物82.3%-87.8%和91.7%-94.7%的氨基酸序列一致性，证明YMMV云南分离物的变异属于种间变异。根据cp基因核心区域构建的系统进化树，显示了按系统进化关系来划分，YMMV可以分为8个基因簇，其中，中国分离物聚集在一起成为2个基因簇，云南分离物除CN20为I簇中的a亚簇外，其他分离物分别为I簇和IV簇中的b亚簇，说明YMMV在系统进化上具有一定的地域分化性。利用重组分析软件RDP 4.22对38个YMMV分离物包括完整的cp、完整的3’-UTR和部分Nib约1058 nt的核苷酸序列进行重组变异分析，检测到重组事件61件，其中40% |
| 并列题名： | Detection， characterization and genetic diversity of viruses in family Potyviridae infecting several tuber crops |
| 题名主题： | 甘薯 山药 重楼 病毒鉴定 实时荧光多重RT-PCR 分子变异 学位论文 |
| 中图分类： | S432.1-533 |
| 个人名称等同： | 兰平秀 著 |
| 个人名称次要： | 李凡 指导 |
| 个人名称次要： | 李如慧 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20181211 |