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： 牛羊5种病原体核酸飞行时间质谱系统检测技术的建立
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 牛羊5种病原体核酸飞行时间质谱系统检测技术的建立/.毛晓月著/.信吉阁, 张冲指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.9 |
| 载体形态项： | 52页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物医学院, 学号2021240434 |
| 提要文摘： | 口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）、蓝舌病病毒（Blue tongue Virus，BTV）、小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）、施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus，SBV）、Q热立克次氏体（Coxiella burnetii）都是能够引起牛羊不同程度发热的病原体。以上牛羊发热疾病初期感染症状较为相似，但治疗方法具有很大差异。能够对这5种牛羊疾病进行快速、准确的检测和识别，这不但有助于在感染初期进行及时诊断和对症下药，还对防治牛羊发热系统疫病，控制疫情的大面积传播，降低农户的经济损失具有重要的意义。快速筛查传染性疾病是保证牛羊养殖业健康发展的关键。目前病原学检测方法是检测FMDV、BTV、PPRV、SBV和Q热立克次氏体的常用方法，但仅能检测单一病原体，或只能达到3重检测，且可能产生假阳性。因此需寻求更为准确和方便的方法检测多重病原。核酸飞行时间质谱技术（Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS），是多重PCR（Multiplex PCR，mPCR）、电喷雾电离质谱（ESI MS)、iPLEX MassArray系统等不同技术结合的新发展，具有高通量、高灵敏度的优点。可检测多达40重病原体。另外，核酸质谱检测体系小，所需样本量小，只需1 μL样品即可进行反应，并且其通量高，短时间内可完成384个样品的检测，在微量样本及大规模检测中具有优势。 本研究基于单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism，SNP）位点设计引物及延伸引物，构建了一种能够同时检测牛羊5种疾病病原的方法。分别以5’UTR作为FMDV的目的基因、NS3基因作为BTV的目的基因、N基因作为PPRV的目的基因、L片段基因作为SBV的目的基因、htpAB基因Qf立克次氏体的目的基因，利用DNAstar基因分析软件及DNAman软件分析、比对目的基因保守区域并构建5种病原质粒，并使用Primer 5及Mass ARRAY Design软件设计多重PCR引物及核酸质谱延伸引物。验证核酸质谱技术的灵敏度，并与这些疫病荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR，qPCR）的国标法检测方法及实验室自建荧光定量PCR方法进行比较，利用核酸质谱技术检测其特异性。收集大量临床样品，采用构建出的核酸质谱方法检测牛羊临床样品，并与荧光定量PCR方法对比检出率。结果表明，针对5种病原目的基因设计出mPCR上下游引物及核酸质谱延伸引物，引物特异性良好，延伸产物理论扩增峰峰值相差16 Da及以上，符合引物设计原则。灵敏度实验结果显示，核酸质谱检出限低至5 copies/μL，而相同疫病的荧光定量PCR方法检出限为58~61 copies/μL。特异性检测的结果表明所构建的5种牛羊病原核酸质谱检测方法能够特异性检测FMDV、BTV、PPRV、SBV及立克次氏体，而BVDV、GTPV、LSDV、EHDV和ORFV临床上常见的牛羊重要动物疫病病原则无法检出。收集临床牛羊样品259份，采用临床样品复核检测，结果表明所构建的核酸质谱检测方法与疫病相应的荧光定量PCR的检测结果复核率为100%。 综上所述，本研究成功地建立了5种牛羊发热疾病核酸质谱检测方法，该方法具有良好的特异性和敏感性，临床样品检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。说明所构建的方法适用于样本的大规模筛查检测，核酸质谱有望成为qPCR技术的补充，具有疾病诊断和监测的潜力，可为其他具有相似临床症状的动物病原的检测提供思路。 |
| 并列题名： | Establishment of Matrix assisted laser desorption ionization time-of-Flight mass spectrometry for detection of 5 pathogens in cattle and sheep eng |
| 题名主题： | 牛羊发热疾病 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 病原同时检测 高通量检测 学位论文 |
| 中图分类： | S851.34-533 |
| 个人名称等同： | 毛晓月 著 |
| 个人名称次要： | 信吉阁 指导 |
| 个人名称次要： | 张冲 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |